摘要：表达载体的设计对于提高外源基因在哺乳动物细胞中的表达量十分重要 .而表达载体中最为重要的元件是启动子 .一些常用病毒来源的启动子 ,如巨细胞病毒即早期启动子 (PCMV IE)仅在S期激活 ,应用这类启动子表达外源蛋白需要宿主细胞不停增殖 ,这对于连续持久大规模培养的宿主细胞不现实 .而人延伸因子 1α亚基启动子 (PEF 1α)不受细胞周期限制 ,且启动子强度高于PCMV IE,对于大规模外源蛋白的生产较为理想 .首先构建了基于PEF 1α启动子的哺乳动物细胞表达载体pED5 ,在增殖缓慢的CHO细胞中 ,此载体表达外源蛋白的能力是应用PCMV IE启动子表达载体的 4 1倍 .由于启动子一般仅能决定基因转录的本底水平 ,而转录激活因子 (transcriptionactivators)对基因转录的影响更大 ,所以另把两个人工转录激活结构域AH和VP2接到λ噬菌体cⅠ蛋白的C端 ,它们通过cⅠ蛋白结合于已插入到PEF 1α启动子的TATA框上游约 2 0 0bp的λ噬菌体OR2 OR1序列上 ,而被“征募”到PEF 1α启动子TATA框附近 ,从而促进基因的转录 .把上述元件均整合进一个表达载体中 ,构建了两个新型表达载体pER AH和pER VP2 .pER AH表达外源蛋白的能力比不含转录激活因子的表达载体略高 ,而pER VP2表达外源蛋白的能力则比不含转录激活因子的表达载体高

摘要：哺乳动物细胞表达系统是生产重组蛋白药物最常用的表达系统。但在无蛋白培养基中 ,哺乳动物细胞生长活力差 ,且容易发生细胞凋亡 ,因而难以大规模培养。为解决此问题 ,应用双顺反子表达载体在CHO dhfr- 细胞中同时表达Igf 1 Bcl 2或Bcl 2 CyclinE基因组合 ,通过Bcl 2使细胞获得抗凋亡能力 ;通过Igf 1或CyclinE促进细胞生长分裂 ,使细胞获得在无蛋白培养基中生长的能力。以上述基因组合转染CHO dhfr- 细胞 ,应用Westernblot从G4 18抗性克隆中分别筛选到Bcl 2高表达克隆若干个 ,对其中表达Bcl 2最高的CHO IB3和CHO BC1做进一步Westernblot和流式细胞分析 ,确认此两个细胞株分别高表达Igf 1 Bcl 2和Bcl 2 CyclinE基因组合。分别通过撤去血清和加入放线菌素D诱导细胞凋亡 ,并以流式细胞术和DNALadder法检测细胞凋亡 ,证明CHO IB3和CHO BC1均具有较强的抗细胞凋亡能力。MTT法证明两个细胞株在不含血清的IMDM培养基中的增殖活力显著高于CHO dhfr- 对照细胞。在细胞培养瓶中的连续培养实验表明 ,CHO IB3和CHO BC1在本实验室设计的IMEM无蛋白培养基中的生长速度和活细胞数显著高于CHO dhfr- 对照细胞。提示此两个细胞系能够在无血清培养基中抗凋亡高活力生长 ,适于作为生物工程宿主细胞。

摘要：目的:调查新型冠状病毒(新冠)感染疫情期间,抗疫医护及工勤人员在医院感染防控(感控)实践(感控意识、措施执行)中的差异,分析并提出相应对策。方法:自主设计感控实践调查问卷,通过互联网问卷调查形式,对2022年3月至4月期间我院参加抗疫工作的医护及工勤人员250人开展实践及培训效果调查。结果:共回收问卷208份,有效问卷192份,其中医护人员158人(82.3%),保洁、保安等工勤人员34人(17.7%)。工勤人员与医护人员进入隔离点前对新冠肺炎相关知识知晓比例(58.8%比89.2%)、医院感控制度流程知晓比例(67.6%比91.1%)、口罩的规范使用比例(82.4%比98.7%)、职业暴露后处置流程的知晓比例(58.8%比98.7%)、感控意识程度(47.1%比98.7%)、生活区感控执行情况(47.1%比94.3%)间存在显著差异(P<0.05)。工勤人员在污染区工作期间出现多汗、呼吸不畅、头晕乏力等身体不适者所占的比例显著低于医护人员(2.9%比11.5%,P<0.001)。通过开展情景模拟化培训考核及实时全程“一对一”现场监督等针对性的措施后,这两类群体的感控实践规范均得到显著改善,医护人员对新冠肺炎相关知识的知晓程度由89.2%上升到99.4%,(P<0.001),工勤人员由58.8%上升到85.3%(P=0.015);医护人员对医院感控制度流程的知晓程度由91.1%上升到98.7%(P=0.002),工勤人员从67.6%上升到100%(P<0.001)。工勤人员中医院感控考核成绩为90~95分的比例从29.4%上升到38.2%,95分以上的比例从32.4%上升到58.8%(P<0.001)。结论:工勤人员的感控实践规范执行及感控意识低于医护人员,是引发医院感染的高风险人群。采用情景模拟化培训考核方式、实时全程进行“一对一”现场监督等措施,能有效提高医护尤其是工勤人员的感控意识和实践能力。