摘要：为建立针对猪圆环病毒3型(porcine circovirus type 3,PCV3)的SYBR GreenⅠ实时荧光定量PCR方法,使用DNAStar软件对GenBank中PCV3的ORF1基因进行保守区域分析,并使用Primer Premier 5软件对PCV3 ORF1基因的高度保守区域设计引物,经PCR扩增后构建了PCV3 ORF1基因的标准品质粒,以构建的标准品质粒为模板,分别从退火温度优化、标准曲线和熔解曲线的建立、特异性、灵敏性、重复性等方面对所建立的检测方法进行探究。特异性试验结果显示,建立的SYBR GreenⅠ实时荧光定量PCR特异性良好,仅对PCV3存在特异性扩增,而对其他8种病毒均无扩增;灵敏度试验表明该方法最低检测量为6.55拷贝/μL,是常规PCR的100倍;以浓度为6.55×10^(2)~6.55×10^(8)拷贝/μL的标准品质粒构建的标准曲线相关系数为0.996,扩增效率可达99.7%;重复性试验结果显示,组内变异系数和组间变异系数均在2%以内。临床试验对100份猪血清进行PCV3检测,结果显示建立的SYBR GreenⅠ实时荧光定量PCR的阳性率为16%(16/100),高于常规PCR的阳性率10%(10/100)。结果表明,建立的SYBR GreenⅠ实时荧光定量PCR可为PCV3的快速诊断、流行病学调查及防控提供技术支持。

摘要：牛诺如病毒(BNoV)是国内新发的犊牛腹泻病病原,高度变异且传染性极强。牛感染该病毒后发病较为突然,能够引起腹泻呕吐等临床症状,一般情况下诺如病毒较为温和但是在暴发时感染率可达45%以上,甚至引起出血性的死亡,给养牛业造成经济损失。因此,建立一种特异性强、灵敏度高、耗时短的检测方法对准确检测BNoV及其流行病学调查等均具有重要意义。实时荧光定量PCR方法敏感而快捷,操作简便,因此荧光定量PCR技术被广泛应用于兽医学的检测。本研究设计了一对BNoV的特异性引物和探针,建立了TaqMan荧光定量PCR的检测方法,为快速检测和及早诊断BNoV提供有效的技术保障。