摘要：目的:建立对牛鞭药材的聚合酶链式反应(PCR)鉴定方法,从分子水平上对牛鞭药材的真伪进行鉴定。方法:提取牛鞭及其伪品(驴鞭、猪鞭、羊鞭)的基因组DNA,并对其完整性、纯度和浓度进行检测。利用GenBank相关信息,以牛鞭的线粒体细胞色素b基因(Cyt b)为靶基因,应用Primer-BLAST在线软件设计特异性引物,并对不同物种鞭类样品进行PCR扩增,对产物进行电泳分析;对获得的牛鞭样本PCR产物进行克隆和DNA测序验证。对所建立的PCR鉴定方法进行特异性和重复性考察验证。结果:提取所得的牛鞭及其伪品DNA的纯度较高,无蛋白质或RNA污染;1.5%琼脂糖凝胶电泳结果显示,牛鞭样本在200~300 bp之间均出现明显的目的基因条带,而其他伪品未见相应条带出现。DNA测序结果证实,所获牛鞭样本基因片段的核苷酸序列与GeneBank中牛鞭物种相似性均为100%。方法学验证结果显示所建方法特异性、重复性均良好。结论:本研究所建基于Cyt b基因的PCR鉴定方法简单、快速,准确性、特异性、重复性均良好,可满足牛鞭及其伪品的分析鉴定需求。

摘要：目的本实验对名贵中药材鹿茸的DNA指纹特征进行研究,从分子水平鉴定及分析鹿茸,研发鹿茸DNA检测试剂盒,并对其进行性能评价。方法以鹿茸细胞色素C氧化酶亚基Ⅰ(CoⅠ)和鹿茸线粒体细胞色素b(cytochrome b,Cyt b)为靶基因,采用生物信息学技术设计5对特异性引物,经实验筛选后确定细胞色素C氧化酶亚基Ⅰ1,即mt DNA CoⅠ1(NC_013834.1)为特异性最好的引物,对鹿茸样品通过聚合酶链式反应(polymerase chain reaction,PCR)进行扩增,优化PCR反应体系及反应条件,研发出鹿茸DNA检测试剂盒。对其性能进行评价,并对市售鹿茸样品进行检测。结果使用鹿茸DNA检测试剂盒提取的DNA纯度均在1.785~1.906内,该试剂盒的特异性体现在检测正品时出现条带,而伪品无条带;灵敏度达3.125 ng·μL-1;反复冻融5、10、15、20次后仍有效用;重复检测正、伪品3次,结果均一致;-20℃保存,有效期可长达1年。对5个地区12个市售样品进行质量分析,合格率为66.67%。结论研发的鹿茸DNA检测试剂盒特异性强、灵敏度高、稳定性及重复性均良好,操作简单,检测样品微量,适用范围广,成本低廉,结果准确,可为中药鹿茸提供一种科学、准确、可靠的鉴定方法。同时也表明市售鹿茸样品质量良莠不齐,混伪品大量充斥。