摘要：【目的】探索猪流行性腹泻病毒(Porcine epidemic diarrhea virus,PEDV)截短M蛋白的序列结构特征与原核表达情况。【方法】根据已公布的PEDV M基因序列设计1对特异性引物,以从阳性病料提取的RNA为模板,通过RT-PCR扩增并克隆PEDV截短的M基因(rM),应用在线生物信息学软件预测rM蛋白的结构特征。将得到的截短的M基因克隆至原核表达载体pET-28a(+)中,构建原核表达质粒pET-28a-rM,将鉴定正确的pET-28a-rM转化大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞,成功构建重组菌株BL21(pET-28a-rM),并对重组菌株进行IPTG诱导表达,优化重组蛋白的表达条件,重组蛋白经亲和层析纯化后进行SDS-PAGE及Western blotting检测,同时应用重组蛋白制备兔抗rM多克隆抗体。【结果】试验克隆得到大小为366 bp的截短的M基因,重组蛋白由121个氨基酸组成,预测蛋白分子质量大小约为12.8 ku。该蛋白的二级结构由无规则卷曲、延伸链、β-转角和α-螺旋组成,占比分别为48.76%、33.88%、9.09%和8.26%。该蛋白不含信号肽,但有跨膜区,包含21个磷酸化位点。SDS-PAGE结果显示,重组蛋白大小约为15 ku,以包涵体蛋白形式存在,在37℃、1 mmol/L IPTG诱导12 h时蛋白的表达量最高。Western blotting检测结果表明,重组蛋白与PEDV阳性血清具有较好的反应原性,纯化的重组蛋白免疫新西兰大白兔获得的高免血清效价高于1∶51200。【结论】本研究成功克隆PEDV截短的M基因,对rM蛋白进行了生物信息学分析,获得了高纯度的rM蛋白,为猪流行性腹泻治疗及检测用生物制品的开发奠定了基础。

摘要：为保证弯曲井段的套管抗挤强度满足作业要求,建立了弯曲载荷状态下的套管受力理论模型,结合ANSYS有限元模拟,研究了同规格套管的抗挤强度与井眼曲率之间的关系;同时建立了室内弯曲套管抗挤试验平台,进行了不同曲率下的套管抗挤试验。研究结果表明:抗挤强度与曲率服从良好的二次函数下降关系,在现场常用曲率范围内呈现线性下降趋势,当曲率继续增加,抗挤强度下降趋势越来越快,二次下降趋势明显;在钢级和尺寸相同条件下,套管壁厚越薄,抗挤强度受弯曲率影响越小,下降趋势越平缓;在每30 m井段曲率0°~7°范围内,有限元模拟、试验测试结果与理论计算结果相近,有限元模拟的最大误差为5. 57%,试验测试的误差最大为2. 91%。研究成果可为套管在弯曲井段的抗挤强度设计提供理论及试验参考。

摘要：井控是海上钻井作业必不可少的研究,救援井是井控作业最后的手段,也是最有效的手段。目前,中国海上并未实施过救援井的作业,但是作为深水钻井的备用手段,救援井的设计在油田开发需求中格外重要。中海油针对南海深水海域的一口风险井做了救援井的设计工作,针对救援井重要设计参数作了详细的分析,本文可以为后续海上救援井的设计提供参考。

摘要：针对伊拉克M油田盐膏层定向井段固井面临的易漏失、顶替效率低、盐层蠕变易造成水泥环破坏等难题,开展了固井方式和浆柱结构优化、抗污染的前置液体系、高密度抗盐水泥浆体系、顶替效率优化技术等研究。通过模拟计算及实验,优选双级固井方式以减小固井循环当量密度(ECD),从而降低固井漏失风险;采用高效前置液体系解决钻井液与水泥浆的污染问题,提高界面胶结强度;优选抗盐降失水剂、加重剂、增强剂等外加剂,研发了一套抗盐性能和沉降稳定性好、稠化时间可调、早期抗压强度高的盐膏层固井水泥浆体系,并制定了井眼准备、套管居中设计及顶替效率优化、水泥环封隔能力评价等一系列固井技术保障和评价方法,最终形成一套盐膏层定向井段固井技术。该研究成果在M油田A1H井φ244.48mm套管固井中成功实施,说明该技术可有效保证M油田盐膏层定向井段固井安全和质量,为该油田盐下水平井的顺利实施提供了技术保障。

摘要：水下井口是深水油气钻井作业的关键装备,承受复杂多变的内压和外部载荷。目前,主要通过理论分析和数值模拟的方法,对水下井口进行强度分析。但缺乏水下井口压力测试的专用测试工装,无法真实反映水下井口系统及其配套工具承压作业时的安全性。针对此问题,本文考虑水下井口系统作业过程中的不同作业工况,针对水下井口不同作业阶段的内压载荷,分别设计了相应的专用测试工装。为保证工装结构的测试稳定性,采用有限元分析方法,建立测试工装有限元模型,开展了不同测试载荷下工装结构的力学响应分析。分析结果表明,水下井口专用测试工装能够开展不同作业阶段的承压能力测试,在测试过程中,工装结构各部件应力均未超出材料屈服强度。本研究可为水下井口测试工装的结构设计和优化分析提供技术支持。