摘要：通过检测外周血AFPmRNA可确定原发性肝细胞癌(hepatocellularcarcinoma,HCC)表达高低与肝癌复发、转移及预后密切相关[1～3]。本文建立了一种具有内参照的定量检测AFPmRNA的竞争性RT-PCR方法,并初步对肝癌组织及癌旁组织中AFPmRNA的表达进行定量分析,现报道如下。1材料与方法1.1临床资料选取我院2002年3月～2003年1月确诊的HCC患者24例,男16例,女8例;年龄35～67岁,平均51岁。手术中切取少量新鲜的肝癌组织及癌旁肝组织,迅速放置-80℃冻存。病理均为原发性肝细胞癌。1.2肝癌、癌旁组织总RNA的提取采用异硫氰酸胍一步法提取组织中的总RNA。1.3引物设计参照文献[4],设计AFP野生型及突变内参引物序列,见表1。表1AFP野生型及突变内参引物序列1.4竞争性内参RNA的合成以肝癌组织总RNA的逆转录产物为模板,以引物对EX1/M2和M1/EX2分别扩增合成两小段产物;扩增产物纯化后混合,由于突变引物M1与M2互补,经变性、复性,产生杂合链;再经外引物对EX1/EX2扩增,生成与野生型AFP仅有一个碱基差异的内参DNA片段;制备克隆,提取质粒DNA,用R...