摘要：中国水稻主要种植在亚热带地区,高温干旱、淹涝、低温、低磷是它遇到的主要非生物逆境。水稻耐逆境分子育种主要采用分子标记辅助选择和转基因技术,改良的主要对象是杂交水稻亲本。不育系侧重于耐涝、耐旱、耐寒性状的分子设计,同时兼顾抗病性状的改良。恢复系主要开展耐低磷和抗除草剂性状的分子设计,同时兼顾抗虫性状的改良。通过不育系与恢复系的合理配组,获得耐多种逆境的杂交稻组合,利用耐逆境杂种优势。

摘要：水稻主要种植在我国亚热带地区,高温干旱、淹涝、低温、低磷是它遇到的主要非生物逆境。水稻耐逆境生态育种主要采用分子标记辅助选择和转基因技术,改良的主要对象是杂交水稻亲本。不育系侧重于耐涝、耐旱、耐寒性状的分子设计,同时兼顾抗病性状的改良。恢复系主要开展耐低磷和抗除草剂性状的分子设计,同时兼顾抗虫性状的改良。通过不育系与恢复系的合理配组,获得耐多种逆境的杂交稻组合,利用耐逆境杂种优势。

摘要：原核生物苏云金杆菌（Bacillus thuringiensis）的杀虫蛋白基因Cry2Aa不仅GC含量低,而且包含影响在真核生物中高效表达元件的结构,如果不加以改造而直接转入水稻中,不仅表达量低而且抗虫效果差。本研究首先通过同义密码子替换,提高了优化基因中GC含量和水稻（Oryza sativa L.）偏爱密码子的比例,消除原始基因中的Poly（A）加尾识别信号序列和内含子切割识别序列,然后在优化基因的5’端添加转运信号肽序列PR1a和3’端添加内质网定位序列KDEL,采用Mfold软件优化mRNA二级结构,最终获得的优化基因Cry2Aa#的GC含量达到57.3%,碱基改变了25.87%,密码子改变了67.51%;消除了在真核生物中影响mRNA稳定的序列,密码子使用频率与水稻基因组基本保持一致;另外,消除了优化基因中存在的9个茎环等mRNA二级结构,其总自由能也相应降低,相比优化之前降低了23.9 kcal/mol。利用优化基因Cry2Aa#构建植物表达载体,转化水稻成熟胚诱导愈伤组织获得转基因植株,其分蘖期叶片中Cry2Aa#蛋白的表达量为8.62;8.88μg/g鲜重,对稻纵卷叶螟（Cnaphalocrocis medinalis）的抗性好,说明优化策略可行。本研究为外源基因优化设计提供重要参考数据,为水稻抗螟虫育种提供了优良抗虫基因资源。

摘要：利用hiTAIL-PCR方法扩增获得转基因水稻B2A68中T-DNA右边界591 bp的旁侧序列,该序列位于水稻第3染色体上。参考已公布的该插入位点的水稻基因组序列和载体左边界序列分别设计上下游引物,扩增获得外源基因插入位点的左边界925 bp旁侧序列。以左右旁侧序列为基础,建立了转基因水稻B2A68事件特异性定性检测方法。采用该方法可从转基因水稻B2A68中扩增到521 bp和307 bp的2条特异性目标条带,其它水稻不会扩增到条带或者上述相同大小的目标条带。该方法特异性强,检测灵敏度达到0.1%,能满足海关、工商、农业等部门的检测需求。

摘要：利用hi TAIL-PCR方法研究了转基因水稻Bar Kasalath-01中外源基因在基因组上插入位点的序列特征,获得了外源基因T-DNA右边界旁侧序列511 bp,与水稻基因组数据库比对发现,外源基因插入位点位于水稻基因组第8号染色体的第3 326 720处。根据整合位点水稻基因组序列和外源基因T-DNA左边界序列设计引物,扩增得到了左旁侧序列783 bp。基于左右旁侧序列,建立了转基因水稻Bar Kasalath-01的事件特异性定性PCR检测方法,扩增片段分别为783 bp和411 bp。该方法特异性强、灵敏度高,能够在Bar Kasalath-01基因组DNA含量为0.1%的模板中检测出转基因成份。依据旁侧序列,还建立了快速鉴定转基因后代植株基因型的3引物PCR检测方法。这些方法的建立,实现了对转基因水稻Bar Kasalath-01转化事件的特异性检测。

摘要：利用hiTAIL-PCR(high efficient thermal asymmetric interlaced PCR)法扩增获得了转基因水稻BPL9K-2的外源基因插入位点的左旁侧序列450bp,与水稻参考基因组数据比对发现其左边界插入在水稻基因组第10号染色体短臂的1 037 765 位核苷酸残基之后。根据水稻参考基因组序列和外源基因右边界序列,设计引物扩增得到485bp的特异片段,通过数据库比对发现其右边界插入在水稻基因组第10号染色体短臂的1 037 825 位核苷酸残基之前。因为外源基因插入和非正常重组,水稻基因组上缺失了59个核苷酸。基于左右旁侧序列,建立了转基因水稻BPL9K-2的事件特异性定性PCR检测方法,可以分别扩增到片段大小为449bp和485bp的特异条带。该方法特异性好,灵敏度高,能够在BPL9K-2基因组DNA相对含量为0.1%的模板中检测出转基因成分。依据旁侧序列,建立了快速鉴定转基因后代植株外源基因型的三引物PCR检测方法。这些方法的建立,为转基因水稻BPL9K-2的应用和检测提供了技术支持。

摘要：抗除草剂、抗螟虫水稻在方便杂草治理、减少虫害损失方面具有重要的应用价值。事件特异性检测方法是监管转基因水稻的必需技术。本研究构建了损伤诱导启动子驱动抗螟虫基因杀虫蛋白基因(gene coding insecticidal crystal protein Cry1Ca, Cry1Ca#)和组成型启动子驱动抗除草剂基因5-烯醇丙酮酰莽草酸-3-磷酸合成酶基因(gene coding 5-enolpyruvylshikimate 3-phosphate synthase, Epsps#)的植物表达载体,利用农杆菌(Agrobacterium tumefaciens)介导法转化籼稻(Oryza sativa subsp. indica) 9K19-5,获得了单拷贝转化事件E1C9K-18,喷施草甘膦显示其具有良好的草甘膦抗性。利用高效热不对称交错PCR法(high efficient thermal asymmetric interlaced PCR, hiTAIL-PCR)扩增获得了转基因水稻E1C9K-18外源基因插入位点的右旁侧序列420 bp,其插在水稻基因组第4号染色体长臂的33 189 510位核苷酸残基之后。根据水稻参考基因组序列和T-DNA的左侧序列,设计引物扩增得到了613 bp的左旁侧序列,其插在水稻基因组第4号染色体长臂的33 189 480位核苷酸残基之前。外源基因插入导致水稻基因组上缺失了29个核苷酸残基。基于左、右旁侧序列,建立了转基因水稻E1C9K-18的事件特异性定性PCR检测方法,以及快速鉴定转基因后代植株外源基因型的三引物PCR检测方法。事件特异性PCR和三引物PCR检测方法将为转基因水稻E1C9K-18的研究和应用提供技术支撑。

摘要：本研究以转Bar基因稻谷外源基因片断(Bar,CaMV35s)为检测对象,应用实时荧光定量PCR(RT-PCR)法建立稻谷中转Bar基因稻谷成分的定量检测方法。分别设计两对内参基因(SPS,RBE4)引物和外源基因(Bar,CaMV35s)引物,应用RT-PCR法对混合稻谷中不同量转Bar基因稻谷(30%、20%、10%、5%、0.9%、0.5%)进行定量检测,检测结果分别为:1、SPS与Bar基因组34.22%、22.14%、11.36%、6.21%、0.74%、0.32%;2、RBE4与Bar基因组28.68%、17.26%、11.92%、6.24%、0.75%、0.35%;3、SPS与CaMV35s基因组32.23%、21.87%、11.15%、4.35%、0.7%、0.37%;4、RBE4与CaMV35s基因组32.35%、22.54%、8.62%、4.62%、0.71%、0.36%。综合分析得出SPS与CaMV35s基因组合对转Bar基因稻谷定量检测的结果较为准确,可见RT-PCR法可以作为定量检测稻谷中转Bar基因稻谷成分的可信方法之一,但其准确性随转Bar基因成分含量的降低而降低,且与所选择的内参基因和外源基因引物有关。

摘要：针对mRNA差异显示技术中的假阳性高和放射性污染等缺陷,文章从改进引物设计、应用非放射性标记、优化PCR参数、假阳性鉴定等方面进行了综述。1采用4种兼并或单碱基引物作锚定引物;用特异和长序列(≥20bp)专一性引物作为随机引物,可增加特异性;在锚定引物之前加上了一段T7启动子序列,在随机引物前加上一段M13重复序列,可使DDRT—PCR的体系的扩增特异性更一致。2针对放射性同位素检测法的缺点,文章提出并比较了几种常用的非放射性同位素标记方法。3保证起始(模板)mRNA质量和浓度,降低dNTP浓度,选择最适的反转录和PCR退火温度,可优化PCR参数。4用两种不同的反转录酶进行反转录平行实验,很容易区分出RNA制备过程中造成的假阳性,目前假阳性鉴定大多还是以Northern印迹为基础,再作些适当的改进。