摘要：【目的】开发一种新型DNA测序酶,解决一代测序技术应对复杂DNA结构模板所面临的主要挑战,如测序信号中断或测序信号快速衰减。【方法】从NCBI数据库中挖掘到了Taq DNA聚合酶和单链结合蛋白SSB基因信息,利用遗传融合、定点突变及基因设计技术获得了一种新型的测序酶Sso-Sequenase。利用亲和层析和离子交换层析,获得了纯化的测序酶。利用抗体修饰技术改良了Sso-Sequenase的性能,并且利用STR技术对其热启动性能进行了表征。选取多组不同类型的复杂模板,采用一代技术对比分析了Sso-Sequenase测序酶试剂盒和传统BigDye测序试剂盒的测序表现。【结果】Sso-Sequenase在大肠杆菌中稳定表达,纯度达到95%以上,产量高达10.5 mg/L。当温度低于35℃时,Sso-Sequenase表现出热启动活性。在复杂模板的一代测序反应中,如重复序列、高GC和发夹结构等样本,Sso-Sequenase测序酶成功完成了所有样本的测序,序列的平均碱基质量QV大于20。相比而言,BigDye测序试剂盒在处理这些复杂样本时,多数样本测序信号出现了显著衰减或中断。【结论】开发了一种纯度好、产量高,兼具热启动活性的DNA测序酶Sso-Sequenase及测序试剂盒,显著提高了复杂DNA结构模板(重复序列、高GC和发夹结构)测序成功率。

摘要：为解决哈图金矿深部开采地压控制及老空区围岩逐渐闭合破断的问题,通过基础试验与充填系统设计及技术研究,在日常采空区充填的过程中也对以往空区进行充填,解决了充填相关问题,通过一段时间的充填生产,部分破坏严重的采空区陆续充填后,地压得到明显控制,老空区围岩的弱化得以消除,保障了生产安全。

摘要：截流式合流制排水系统是我国主要的排水体制之一。以昆明市主城区明通河合流制排水系统为背景,研究了雨季产污及迁移规律及削减入湖污染物的措施,并进行了工程示范。示范研究结果表明,在CODCr截留率小于80%、截流倍数n0=1-3、调蓄量2-20 mm（以不透水地面计）,提高截流倍数或调蓄量均可显著提高污染物截留率。截流倍数与调蓄量可表述为截留系数的函数,截流倍数增加1等效于调蓄量增加8 mm,截留系数为CODCr截留比率的幂函数。