摘要：利用Primer ExplorerV4软件,针对兔波氏杆菌16SrRNA基因设计4条LAMP引物,优化反应条件,检测特异性、敏感性并对临床样品进行检测。结果显示,LAMP反应在62℃恒温扩增1h即可完成,操作简便,不需要PCR仪等复杂仪器,结果可经电泳检测及肉眼观察;具有良好的特异性;敏感性为普通PCR的100倍,最低可检测到1.65×10-6 mg/L的细菌基因组DNA。用建立LAMP检测方法对32份疑似兔支气管败血波氏杆菌(Bb)样品检测呈阳性,与PCR检测结果相符。该方法的建立为Bb的临床快速检测提供了新的思路。

摘要：参考GenBank中兔巴氏杆菌16SrRNA和波氏杆菌的fim2的基因序列,应用Premier 5.0软件在二者高度保守区设计了2对引物,建立了适合巴氏杆菌和波氏杆菌快速检测的多重PCR检测方法。以该方法对巴氏杆菌和波氏杆菌参考菌株进行PCR扩增,分别能从各自的基因组中扩增出与试验设计相符的644bp和425bp的特异性DNA片段。将扩增所得的DNA片段进行克隆测序,测序结果表明分别为巴氏杆菌16SrRNA和波氏杆菌fim2基因序列。该方法对波氏杆菌的检测下限为4×102 CFU,对巴氏杆菌的检测下限为6×101 CFU。对兔源性沙门菌、葡萄球菌、大肠杆菌、魏氏梭菌扩增结果为阴性。表明所建立的RT-PCR检测技术具有特异、快速和敏感的特点,可用于鉴别诊断兔巴氏杆菌和波氏杆菌以及2者混合感染。

摘要：为建立一种快速准确检测兔多杀性巴氏杆菌(***)的PCR方法,本研究以***的高度保守的16S rRNA为靶基因,参考已公布的***的16S rRNA基因设计1对特异性引物,优化PCR反应条件,建立了*** PCR快速检测方法。该PCR方法的敏感性达到60 cfu/mL,采用该PCR方法扩增***标准株和分离株均能扩增出643 bp的目的片段,扩增兔大肠杆菌、支气管败血波氏杆菌结果为阴性,证明本实验所建立的*** PCR检测方法快速、敏感、特异、可靠,可用于***的快速鉴定与诊断。同时用建立的PCR方法对临床疑似病兔的脏器分离菌进行扩增,可扩增出目的条带,与细菌的分离结果相一致。

摘要：为建立一种快速、准确地检测兔多杀性巴氏杆菌(Pm)的环介导等温扩增(LAMP)方法,本研究利用设计的4条特异性引物,在链置换DNA聚合酶的作用下,优化反应条件,并进行特异性和敏感性试验。结果表明,建立的LAMP扩增反应可以在70 min内完成;具有良好的特异性;敏感性为普通PCR的10倍,最低可以检测量为16 cfu的DNA;采用建立的LAMP方法对27份经PCR检测Pm阳性的样品进行检测,结果均呈阳性。该方法的建立为Pm在临床上的快速检测提供了一种新的技术手段。

摘要：旨在建立一种针对猪大肠埃希菌和沙门氏菌的特异、高效的双重PCR检测方法并应用于临床样品检测。本研究针对大肠埃希菌保守序列16SrRNA基因和沙门氏菌的特异性基因侵袭蛋白A基因(invA),采用Primer 3.0 Plus分别设计合成两对特异性引物,在此基础上建立并优化双重PCR反应体系。结果显示,该双重PCR检测方法能有效扩增出猪大肠埃希菌和沙门氏菌的144 bp和610 bp的特异性片段,PCR产物测序结果为目标片段;对副猪嗜血杆菌、产气荚膜梭菌、巴氏杆菌、波氏杆菌、链球菌的扩增结果均为阴性。将该方法应用于临床样品检测,对55例病猪的血液和组织样品进行分离检测,检测出大肠埃希菌12例,沙门氏菌4例,混合感染1例,与已报道的PCR检测方法符合率为98.20%。表明该研究建立的双重PCR体系可为临床猪大肠埃希菌、沙门氏菌及混合感染提供一种灵敏且高效的检测方法。

摘要：参考GenBank中登录的多杀性巴氏杆菌序列设计了一对特异性引物,采用PCR方法分别扩增出兔多杀性巴氏杆菌C51-2-499株、C51-3-500株的OmpA全长片段,克隆到pMD18-T载体上进行序列测定和分析。结果表明：OmpA全长1.068 kb,含有一个1.068 kb的开放阅读框（ORF）,编码353个氨基酸,相对分子量为37 969.8 kD,等电点pI为8.90。与6株参考菌株比较,核苷酸同源性为89.7%~99.1%,氨基酸同源性为82.9%~98.6%。

摘要：参考GenBank中的Ⅰ型鸭肝炎病毒(DHV-Ⅰ)全基因序列设计引物,采用RT-PCR方法扩增了DHV-ⅠVP3基因,将VP3基因与pET-28a(+)表达载体连接后,转化宿主BL21(DE3),用0.1 mmol·L-1的IPTG诱导表达,收集菌液进行SDS-PAGE电泳,Western-blotting分析蛋白免疫原性。电泳结果表明,VP3在大肠杆菌中表达量较高,表达产物的分子量约为27 kD。免疫印迹试验表明Ⅰ型鸭肝炎病毒VP3蛋白在大肠杆菌中表达产物具有免疫原性。

摘要：鸭疫里默氏杆菌病对养鸭业危害严重,传统及常规检测方法均有不足,因此有必要建立起一种更加快速简捷、敏感实用的菌落PCR法。根据GenBank公布的鸭疫里默氏杆菌ATCC株OMPA基因序列,在基因保守区设计特异性引物,直接挑取单菌落作为模板,从分离鉴定的1,2,10,11型15株菌及1,2,10,11型4株参考菌株中均能扩增出大小为670 bp的特异性核酸片段,而对照的大肠杆菌、多杀性巴氏杆菌的扩增结果均为阴性;将培养菌用TE作10倍梯度稀释,最低检出限量为80个鸭疫里默氏杆菌;建立的菌落PCR与常规PCR法比较,两种方法均能扩增出相同的特异性条带。结果表明,菌落PCR法具有较好的特异性和敏感性,与常规PCR法结果完全一致,且更加快速简捷,在临床应用上具有更好的实用价值。

摘要：参考GenBank中鸭疫里默氏菌和大肠杆菌的外膜蛋白A(OmpA)基因序列,应用PrimerPremier5.0软件在二者高度保守区设计了2对引物,建立了适合鸭疫里默氏菌和大肠杆菌的快速检测的多重PCR检测方法。以该方法对已分离并保存的鸭疫里默氏菌和大肠杆菌进行PCR扩增,分别扩增出与试验设计相符的670、408bp的特异性DNA片段。将扩增所得的DNA片段进行克隆测序,测序结果表明分别为鸭疫里默氏菌和大肠杆菌OmpA基因序列。该方法对鸭疫里默氏菌和大肠杆菌的检测下限分别为4×104CFU/mL和3×104CFU/mL。表明所建立的PCR方法具有特异、快速和敏感的特点,可用于诊断鸭疫里默氏菌、大肠杆菌以及两者的混合感染。

摘要：本试验旨在了解近年来浙江省兔支气管败血波氏杆菌的感染情况及耐药状况,指导合理用药,检测细菌的耐药基因,探究其耐药机理。根据细菌形态、培养特性、生化试验,结合PCR法对分离菌株进行鉴定;K-B纸片扩散法检测细菌对18种常用抗生素的耐药率;设计耐药基因特异性引物,PCR法扩增耐药基因,并进行测序分析。结果显示,分离鉴定出2012—2014年22株兔支气管败血波氏杆菌;药敏结果显示,分离菌对青霉素G、头孢拉定、链霉素、林可霉素、克林霉素、甲氧嘧啶耐药严重,对多黏菌素B、左氟沙星、强力霉素、四环素等药物敏感,耐β-内酰胺类药物的细菌中检测到耐药基因blaTEM。结果表明,兔支气管败血波氏杆菌是引起兔呼吸道疾病的主要病原菌,分离菌多重耐药,耐药率较高,检测到的耐药基因与耐药表型相符。