摘要：目的构建大鼠骨桥蛋白（OPN）基因的shRNA慢病毒表达载体，并观察其对大鼠血管平滑肌细胞（VSMC）增殖和凋亡的影响。方法针对OPN基因的不同部位设计3对shRNA的寡核苷酸片段，克隆到慢病毒载体PLKO-1中，构建靶向OPN基因的慢病毒载体PLKO-1-OPN-shRNA，检测并筛选最佳抑制效率的shRNA干扰载体。并将其转染大鼠血管平滑肌细胞，用逆转录-聚合酶链反应（***）检测VSMCsOPNmRNA表达水平；蛋白免疫印迹法（Westernblot）检测VSMCOPN蛋白表达水平；噻唑蓝（MTT）比色法和流式细胞仪检测沉默OPN基因后对VSMC增殖和凋亡能力的影响。结果靶向OPN慢病毒表达载体构建成功。重组慢病毒载体PLKO-1-OPN—shRNA转染后可显著抑制VSMCs的OPNmRNA及蛋白的表达水平，OPN蛋白表达明显下降，其中以PLKO-1-OPN2-shRNA最为明显，达到90％以上；转染PLKO-1-OPN2-shRNA后72h的细胞增殖能力[吸光度（A）值=0．365±0．011]明显低于未处理组（A值=0．941±0．028）和阴性对照组细胞（A值：0．941±0．040，P〈0．05）；而早期细胞凋亡率（20．44±2．69）％和晚期细胞凋亡率（16．79±1．01）％均明显高于未转染组和阴性对照组（P〈0．01）。结论成功构建并筛选最佳抑制效率的靶向OPN慢病毒表达载体PLKO-1-OPN2-shRNA，该载体能有效抑制大鼠血管平滑肌细胞增殖，并促进细胞凋亡。

摘要：目的:回顾分析联合冠状动脉搭桥及其相关心脏手术的临床效果。方法:134例患者中,75.4％有Ⅲ-Ⅳ级心绞痛(CCSS),冠状动脉造影示梗阻性病变在左主干(LM)34例次、左前降支(LAD)130例次、对角支91例次、回旋支84例次、右冠状动脉80例次。伴有冠状动脉弥漫性病变41例。左室射血分数(LVEF)18%-69%,其中45％-30％ 50例,<30％ 13例,伴左心室壁瘤56例,同时伴瓣膜功能不全42例。全部患者均在体外循环下行冠状动脉搭桥手术,对36例伴有冠状动脉弥漫性病变者同期激光心肌打孔(TMR),同期左心室壁瘤切除三明治式缝合11例,巨大室壁瘤心内补片左室成形45例;同期心脏瓣膜手术42例。结果:人均旁路2.46支,6例患者需主动脉内球囊反搏(IABP)辅助11-54 h;二次开胸止血6例;室上速/房颤28例,室性心律失常10例,2例电转复,余均药物控制;全组手术死亡3例,死亡原因分别为严重低心排综合征(2例)和多脏器功能衰竭。其余病人手术后心绞痛等症状均缓解,心脏功能明显改善。随访4-60个月(平均12.7月),随访率89％,65例已恢复全日制工作。结论:与单纯冠状动脉搭桥相比,联合冠状动脉搭桥及其相关心脏手术时间长,操作复杂,但只要设计良好的手术方案,仍能取得满意的效果。