摘要：【目的】探讨神经托平(neurotropin)对6-OHDA诱导的SD(Sprague-Dawley)大鼠黑质多巴胺能神经元极早期凋亡的拮抗作用。【方法】实验组SD大鼠,按完全随机设计分3组,每组16只,分别用神经托平15、30、45U·kg-1·d-1腹腔内注射,对照组(32只)用等体积的生理盐水腹腔内注射。2周后用6-OHDA立体定向注射于大鼠纹状体区。在6h、12h、24h、48h、72h、96h、1周及2周时采用原位末端标记法(TUNEL)检测黑质细胞的凋亡,用流式细胞仪检测凋亡率,用免疫组化法检测纹状体区多巴胺能神经纤维的含量的变化。【结果】对照组在6-OHDA作用后的6h即可检测到黑质细胞凋亡,在48h达到高峰,凋亡率6.4%±0.2%;神经托平30、45U·kg-1·d-1预处理后则可降低细胞凋亡(P<0.05),其中45U·kg-1·d-1预处理组在48h仅为2.3%±0.1%,与实验组比有统计学意义,同时纹状体区多巴胺能神经纤维含量的减少较对照组亦有统计学意义(P<0.05);而15U·kg-1·d-1组则无明显效果。【结论】大剂量神经托平可拮抗神经毒性物质对黑质神经元的凋亡作用,避免了投射至纹状体区多巴胺能神经递质的减少,为今后探讨帕金森病的防治提供了重要的理论依据。

摘要：背景：已证实放射性神经干细胞损伤是放射性脑损伤的可能途径之一，而碱性成纤维细胞生长因子对放射性损伤具有保护作用，但其机制尚不清楚。目的：观察外源性碱性成纤维细胞生长因子对放射诱导C17．2神经干细胞凋亡的抑制作用。设计、时间及地点：随机分组设计，对比观察，于2006-11／2008—06在中山大学附属第二医院林百欣实验中心完成。材料：C17．2神经干细胞系为小鼠小脑祖细胞永生化后构建的神经干细胞系。方法：以直线加速器进行总量为8Gy外照射C17．2神经干细胞建立离体放射性损伤模型，以1×10^7L^-1的细胞浓度接种C17．2神经干细胞悬液至96孔板，每孔加细胞悬液200uL，按0，25，50，100μg／L（0μg／L作对照）分别加入碱性成纤维细胞生长因子干预。主要观察指标：四甲基偶氮唑盐法检测细胞活性并拟合生存曲线，流式细胞仪检测细胞凋亡率。结果：随碱性成纤维细胞生长因子浓度升高，C17．2神经干细胞增殖比明显增加（P〈0．01），呈现明显剂量效应关系。碱性成纤维细胞生长因子浓度为100ug／L时活性最强，未显示细胞毒性。流式细胞仪检测结果显示：对照组细胞凋亡率高于25，50ug／L碱性成纤维细胞生长因子组（P〈0．01），25，50，100μg／L碱性成纤维细胞生长因子组组间相比，差异具有显著性意义（P〈0．05～0．01）。结论：外源性碱性成纤维细胞生长因子对放射诱导的C17．2神经干细胞凋亡具有明显抑制作用。

摘要：背景:记忆力下降是放射性脑病早期的主要临床表现,已有许多人认为神经节苷酯在神经修复中对记忆功能具有改善作用。目的:研究神经节苷酯对鼠脑放射性损伤后空间学习记忆能力减退的影响。设计:以动物为观察对象的随机对照实验。单位:中山大学第二附属医院的神经科和放射科。材料:实验于2001-03/2002-05在中山大学附属第二医院实验室完成。选取SD大鼠80只,分为空白对照组、神经节苷酯治疗组、生理盐水治疗组、未干预组,20只/组。干预:神经节苷酯治疗组、生理盐水治疗组、未干预组大鼠麻醉后头部接受60Coγ射线照射,7Gy/次,1次/d,连续照射6d,总剂量42Gy。空白对照组麻醉后不予照射。接受照射的3组每天照射后隔1h给药,神经节苷酯治疗组腹腔注射神经节苷酯30mg/kg;生理盐水治疗组注射等量的生理盐水,1次/d,连续6d;空白对照组和未干预组不给药。评估:①照射结束后采用Morris水迷宫的定位航行实验,通过记录大鼠寻找平台所需时间(潜伏期)来测定大鼠对水迷宫的学习记忆能力。②采用空间搜索实验,通过记录大鼠在120s内搜索平台的路线图,测量其平台象限的游泳距离占总距离的百分比,从而测定大鼠学会寻找平台后,对平台空间位置记忆的能力。③迷宫试验结束后将神经节苷酯治疗组、生理盐水治疗组、未干预组大鼠断头取?

摘要：背景:如何抑制或减少神经干细胞凋亡的发生,促进缺氧后神经干细胞的存活,成为脑梗死神经干细胞移植治疗的研究热点。目地:观察在缺氧状态下转染人类persephin基因对神经干细胞凋亡的作用。设计:完全随机分组,对照实验。单位:中山大学附属第二医院神经内科。材料:实验于2006-07/2006-12在中山大学附属第二医院林百欣实验中心完成,重组腺病毒pAd persephin由本实验室构建保存,C17.2神经干细胞由美国哈佛大学医学院Snyder教授惠赠。胰蛋白酶、DMEM/F12购自Gibco公司;胎牛血清来自杭州四季青生物工程公司;多聚赖氨酸购自美国Sigma公司;TUNEL检测试剂盒,阳离子脂质体FuGENE购自瑞士Roche公司;S-P免疫组化试剂盒及DAB显色剂购自福建迈新生物工程公司;鼠抗人Nestin单抗,Persephin兔抗人多抗购自美国Santa Crus公司,persephin反义寡核脱氧苷酸由上海生工合成。方法:①实验干预:将携带人类Persephin基因的重组腺病毒感染C17.2神经干细胞,分为4组,A组:正常对照组,C17.2神经干细胞不作缺氧处理。B组:缺氧处理组,即置于37℃、体积分数0.95N2,体积分数0.05CO2厌氧培养箱培养。C组:缺氧+pAdpersiphin转染组,即:将携带人类Persephin基因的重组腺病毒感染C17.2神经干细胞,pAdpersiphin转染48h后的细胞置同B组条件的厌氧培养箱培养。D组:缺氧+pAdpersiphin转染组+persiphin反义寡核脱氧苷酸,即pAdpersiphin+persiphin反义寡核脱氧苷酸转染。②实验评估:Western-blotting法分析Persephin蛋白的表达;TUNEL法检测凋亡指数;流式细胞术测定细胞凋亡率的变化。主要观察指标:Persephin蛋白的表达、细胞凋亡指数和凋亡率。结果:①Persephin蛋白表达:C组细胞经Western blot检测可见一特异性蛋白条带存在,Mr约为24000,符合预期结果,说明persiphin成功表达,D组亦可见一Mr 24000的条带,但条带较单纯pAdpersiphin感染组明显为淡,说明反义persiphin反义寡核脱氧苷酸可成功抑制pAdCMVpersiphin的表达。②细胞凋亡指数:C组凋亡细胞明显减少,凋亡指数低于B、D组(P<0.01),但高于A组(P<0.01),表明细胞凋亡未完全避免。③细胞凋亡率:B、D组凋亡率明显高于A组(P<0.01),C组明显较B组、D组低(P<0.01)。结论:腺病毒介导的Persephin基因能高效表达Persephin;外源性Persephin对C17.2神经干细胞具有抗凋亡作用,能够提高C17.2神经干细胞对缺氧的耐受性。

摘要：背景:帕金森病患者脑内黑质多巴胺能神经元变性导致芳香族氨基酸脱羧酶(aromaticL-aminoaciddecarboxylase,AADC)活性水平的降低及波动是产生帕金森患者临床症状和在L-dopa替代治疗时“症状波动”等不良反应出现的重要原因之一。目的:探讨AADC基因脑内移植对帕金森病的治疗作用及其在左旋多巴治疗过程中的地位,并探讨阳离子脂质体介导的基因治疗方法的有效性。设计:2×2析因设计。地点和材料:中山大学附属第二医院林百欣医学研究中心,材料主要包括人嗜铬细胞瘤组织,TRIzol,真核表达载体质粒pCDNA3,阳离子脂质体,6-OHDA,阿朴吗啡,AADC单克隆抗体,SD大鼠。干预:使用基因克隆、亚克隆技术构建pCDNA3-AADC真核表达载体;将帕金森病模型的SD大鼠随机分为实验组与对照组,分别以pCD-NA3-AADC重组体和pCDNA3空载体进行阳离子脂质体包裹后,注射于帕金森病SD大鼠纹状体内,并在该基础上对两组大鼠分别采用一定浓度的L-dopa进行治疗。采用免疫组化方法确定AADC的表达。主要观察指标:①AADC基因脑内移植后两组大鼠的旋转行为。②采用一定浓度的L-dopa进行治疗对大鼠旋转行为的影响。结果:①阳离子脂质体包裹的pCDNA3-AADC重组体脑内注射后,在3,7,14,21,28d时大鼠的旋转行为获得了一定的改善(P<0.05),分别改善了56.0%。