摘要：为探讨核因子E2相关因子(nuclear factor E2 related factor,Nrf2)基因沉默及激活后对牛子宫内膜上皮细胞的影响,本试验利用小分子干扰(siRNA)技术及Nrf2的激动剂叔丁基对苯二酚(tBHQ),分别从Nrf2基因的下调和上调表达来研究Nrf2对牛子宫内膜上皮细胞中血红素加氧酶-1(HO-1)和Homebox A10(HOXA10)基因表达的影响。结果显示,经实时荧光定量PCR方法检测,在设计的2条siRNA序列(siRNA-1209和siRNA-1672)中,siRNA-1672在终浓度为75 nmol/L、作用时间24 h时抑制效果较好,抑制效率在80%以上;经Western blotting方法检测,Nrf2蛋白表达水平在转染后96 h极显著下降(P<0.01),而HO-1和HOXA10的mRNA表达量分别下降了60%和70%(P<0.01),蛋白表达量在96 h后极显著或显著下降(P<0.01;P<0.05)。此外,经CCK8方法检测,Nrf2基因表达沉默后,牛子宫内膜上皮细胞增殖能力减弱。而在tBHQ激活Nrf2试验中,经Western blotting方法检测,tBHQ终浓度为30μmol/L时Nrf2蛋白表达量最高,极显著高于对照组(P<0.01),且HO-1和HOXA10的蛋白表达量与对照组相比也明显上升。结果表明,本试验设计的siRNA-1672能特异性地抑制牛子宫内膜上皮细胞Nrf2的表达,而抑制Nrf2的表达会导致牛子宫内膜上皮细胞增殖能力下降,且Nrf2对牛子宫内膜上皮细胞HO-1和HOXA10基因表达存在调控作用。

摘要：试验选用288只产蛋鸭,随机分成3组,每个组8个重复,每个重复12只。按照单因子3水平设计,压榨亚麻籽的添加量分别为0、1.5%和3.0%,试验期50 d。正式试验开始以后,每隔10 d检测鸭蛋中的单不饱和脂肪酸(MUFA)、多不饱和脂肪酸(PUFA)、二十二碳六烯酸(DHA)、ω-3 PUFA含量和蛋品品质。试验结束后,各组空腹采取6只蛋鸭血样,测定白细胞介素-6(IL-6)和总抗氧化力(T-AOC)。结果表明:(1)饲料中添加亚麻籽能增加鸭蛋中ω-3PUFA和DHA含量,添加的第30 d后达到峰值,差异显著(P0.05)。(3)亚麻籽的添加显著提高了蛋鸭血清总抗氧化力(P0.05)。

摘要：为了建立奶牛早期妊娠诊断检测方法,试验用GenBank公布的奶牛触珠蛋白(haptoglobin)Hp基因序列设计引物,扩增出Hp基因全长片段,将Hp基因亚克隆至Bac-to-Bac昆虫/杆状病毒表达系统的供体质粒pFastBacHTb的多克隆位点中,转入含昆虫杆状病毒骨架质粒的***10Bac感受态细胞中,通过蓝白斑筛选获得穿梭质粒rBacmid-Hp阳性克隆,在脂质体介导下转染昆虫细胞sf9,获得含Hp基因的重组杆状病毒质粒rBacmid-Hp;用纯化的rBacmid-Hp蛋白免疫Balb/c小鼠,将免疫小鼠的脾细胞和鼠SP2/0骨髓瘤细胞融合,采用间接ELISA法和有限稀释法筛选杂交瘤细胞;分别用ELISA法、Western-blot检测单克隆抗体腹水效价及特异性。结果表明:在sf9细胞中成功表达Hp蛋白,该蛋白具有良好的生物学活性;制备了8株单克隆抗体,分别命名为3B12、4F4、4F11、5D7、5G8、7E5、10C3和12F9,腹水效价均在1∶5.12×10^4以上;亚类鉴定显示,除3B12、4F11、10C3为IgG2a外,其余单克隆抗体均属于IgG1;筛选出1对配对单克隆抗体,分别为12F9和4F11。说明Hp蛋白可在Bac-to-Bac昆虫/杆状病毒表达系统中高效表达,并成功筛选出一对配对的高效单克隆抗体。

摘要：根据牛SRY基因序列设计合成了2对嵌套式引物作为公牛特异性引物,同时根据牛β珠蛋白基因(HBB)序列设计了1对引物作为内参照引物,建立了巢式PCR反应体系。对50头母牛和30头公牛DNA样品的检测表明,母牛只能扩增出558 bp的HBB基因片段,而公牛则可以扩增出558 bp的HBB基因片段和219 bp的SRY基因片段,其鉴定结果与实际性别一致。同时,以微量的卵母细胞和精子细胞为模板对该反应体系的灵敏性进行了检验,结果表明,该反应体系可对10个细胞水平进行准确鉴定。

摘要：为了探讨Nrf2基因被干扰后对牛睾丸细胞的影响,试验采用了实时荧光定量PCR和Western boltting方法检测了牛睾丸细胞中HO-1和NQO1基因的表达。结果显示,设计的siRNA-1672在终浓度为50nmol/L时抑制效果较好,Nrf2基因表达显著下降,HO-1和NQO1基因在mRNA水平上表达显著下降。Nrf2被干扰72h后,HO-1和NQO1蛋白质水平表达水平明显下降。说明Nrf2对牛睾丸细胞中HO-1和NQO1基因的表达存在调控作用。

摘要：抗精子抗体11被认为在雄性生殖道的先天免疫及生殖方面起着重要的作用,牛抗精子抗体11E(SPAG11E)主要存在睾丸、附睾等生殖道中。本实验根据GenBank中牛SPAG11E基因序列(登录号:DQ838983.1)设计特异性引物,提取牛睾丸组织总RNA,经RT-PCR获得SPAG11E基因序列,构建原核表达载体,并转入BL21(DE3),利用IPTG诱导表达,同时检测了重组蛋白体外抑菌活性。结果显示,成功扩增了牛SPAG11E基因的CDS序列,其与GenBank公布序列相一致;正确构建了原核表达载体pET-32a(+)-SPAG11E,最佳表达条件为IPTG终浓度1.0mmol/L、诱导时间4h;重组蛋白对检测的6种菌没有明显的抑菌作用。

摘要：以大肠杆菌4种毒力因子EAST1、FimH、F17、STX1为模板设计特异性引物并优化各项反应条件,建立犊牛腹泻的多重PCR检测方法,利用所建立的多重PCR方法对湖北省某牛场采集的15个样本进行检测。结果表明,在该牛场中携带FimH毒力基因的阳性菌株引起的大肠杆菌广泛存在,携带F17毒力基因的阳性菌株次之,并存在2种毒力基因混合感染的现象。综上所述,该方法的建立为大肠杆菌中常见毒力因子的快速检测及分子流行病学调查提供了新手段。

摘要：本试验旨在研究亚麻籽饼在育肥猪日粮中的应用效果和合适添加剂量,为亚麻籽饼用于育肥猪日粮提供依据。采用单因子试验设计,选取54头体重相近(69.9kg±3.92kg)的育肥猪随机分为3组,每组3个重复,每个重复6头猪,对照组饲喂基础日粮,试验组一饲喂在基础日粮中添加3%亚麻籽饼的试验日粮,试验组二饲喂在基础日粮中添加5%亚麻籽饼的试验日粮。试验期45d,结果显示:(1)日粮中添加3%的亚麻籽饼对育肥猪生长性能无显著影响(P>0.05),提高了血液总抗氧化能力(T-AOC)和总超氧化物歧化酶(T-SOD)活性,降低了丙二醛(MDA)含量(P>0.05)。(2)日粮中添加5%的亚麻籽饼极显著降低了育肥猪的平均日增重(P0.05)。试验结果提示育肥猪日粮中亚麻籽饼的添加水平以不超过3%为宜。

摘要：肉牛的增重速度和饲料报酬直接反映着肉牛的养殖效益，要使肉牛尽快育肥，必须满足其营养物质的供给。武汉地区由于肉牛养殖基本以散养为主，规模化养殖数量不足，作为肉牛育肥技术核心的预混料专门产品缺乏，多数有一定规模的养殖户不重视预混料的使用，因此满足不了肉牛育肥所需要的营养，育肥效果差。我们根据多年的研究成果，专门设计配制了肉牛育肥专用预混料并进行了饲养对比试验。现报道如下。