摘要：介绍了自主研发的一套用于评价人体外周神经纤维功能的振动觉阈值定量检测系统.该系统的设计以神经生物学原理和实验心理学理论为基础.阈值由渐增渐减转换规则和强迫选择法两者联合得到,并用心理物理学统计算法过滤人体主观感受的影响.该系统具有医生病人双盲的自动检测功能,也兼具医生干预.用该振动觉阈值检测系统进行两组不同的对比实验,分析结果表明,该系统具有良好的重复性、可靠性和精确性.

摘要：帕利珠单抗(Synagis)是用于预防呼吸道合胞病毒的经典药物,但由于价格昂贵,限制了其应用范围。该研究采用中国仓鼠卵巢细胞(CHO细胞)表达帕利珠单抗类似药,并以响应面设计法对培养关键参数进行优化,筛选培养基组合以提高产量。研究结果显示,优化工艺参数为以AM01-AF02为基础-补料培养基,每1 mL含5.0×10^(6)个细胞的密度接种,37℃培养7d后,降温至33.0℃,培养至d16。该工艺条件下,可将帕利珠单抗类似药的产量在摇瓶和3L生物反应器中分别提升69.3%和30.0%。随后,对生物反应器上发酵生产的抗体进行了纯化工艺研究,为帕利珠单抗类似药的后续工艺开发提供了参考。

摘要：鲨烯是一种在食品、医药等行业有着广泛应用的三萜类化合物。大肠杆菌被认为是非常有潜力的合成鲨烯的底盘细胞。为提高大肠杆菌内鲨烯的合成水平,以三个诱导型启动子p3-lac、p6-lac、p10-lac强度为水平,以dxs、idi、ispA三个4-磷酸甲基赤藓糖醇途径(methylerythritol 4-phosphate pathway,MEP)的限速酶基因作为因素,进行正交设计,同时引入鲨烯合酶基因,构建了9株重组菌株进行鲨烯发酵实验。通过绿色荧光蛋白表达水平确定了p3-lac启动子强度相对最强,p10-lac相对最弱。通过分析正交发酵实验数据的极差,发现dxs是影响鲨烯产量最主要的因素,其次是ispA,最后是idi,且三个因素最佳水平组合所对应的菌株为1063/DE3,产量达到了450 mg/L。最终获得了一株鲨烯产量相较于出发菌株提高了681倍的产鲨烯重组大肠杆菌菌株,并为提高大肠杆菌内鲨烯产量提供了新的策略。

摘要：鲨烯是一个多不饱和碳水化合物,在生物体内通过甲羟戊酸(MVA)途径或2-甲基-D-赤藓糖醇4-磷酸(MEP)途径生物合成,具有多种生理功能。利用合成生物学技术设计微生物生产鲨烯是一个有效的方法。为了增加鲨烯产量,本研究将来源于粪肠球菌(Enterococcus faecalis)的MVA上游途径和来源于酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)的MVA下游途径引入到能够生产鲨烯(0.15 mg*L)的BL21(DE3)菌株YSS2中,产生的菌株YSS17的鲨烯产量为0.73 mg/L。为了进一步增加鲨烯的产量,将mvaS基因的丙氨酸(Ala^(110))突变为甘氨酸(Gly),鲨烯产量达到1.0mg/L。通过trc启动子代替质粒pET2的MVA下游途径T7启动子,以及将MVA上游途径基因置于低拷贝质粒pACY2中,最终设计的菌株YSS20能够产生鲨烯1.68 mg/L,是菌株YSS2的11.2倍。

摘要：以假单胞菌的头孢菌素C(CPC)酰基转移酶为基础,根据顶头孢霉密码子偏爱性及RNΑ二级结构预测分析,设计并合成了全长2349bp的CPC酰基转移酶基因ecs,并将其在大肠杆菌中表达。结果证明,表达蛋白能将CPC转化为7-ΑCΑ。将ecs表达质粒转化CPC产生菌顶头孢霉,通过PCR、Southern blotting以及Western blotting等方法验证,表明ecs基因已成功整合到顶头孢霉染色体上并得到表达,重组菌的发酵也显示部分CPC直接转化成了7-ΑCΑ。

摘要：微小RNA(micro RNA)是一类长约22nt的非编码单链RNA,由前体经酶作用而得,它是细胞的内源性物质,普遍存在于动植物中,高度保守,在生命体的生长、发育、疾病发生发展的过程中起到了基因调控作用,它与重大疾病,如肿瘤、心脏疾病、神经性疾病等都有着密切的关联,因此成为新药开发的一个重要新靶点,以它为靶点的药物设计和药物研发工作也在不断探索中。本文就其研究的历史、生物合成和作用机制、生物功能、与疾病的关系以及以microRNA为靶点的药物设计的研究情况做一个简单的综述。

摘要：通过简单可靠的方法提升目标产物产量是代谢工程的一大目的,但代谢流量的不均衡利用与酶活性不足往往会限制生物合成的效率。目前已有许多关于单个酶的优化研究,本研究展示了一种可以平衡代谢流量的新型组合优化方法,该方法基于Gibson组装(GA)与双顺反子设计(BCD)标准起始元件。以MEP通路为例,通过选取2个限速酶编码基因;dxs和idi,与5个绝缘BCD起始元件,在有限步骤内产生了一个组合优化库,再以β-胡萝卜素为指示物进行筛选,使产量提升至10倍以上。研究结果证实了该组合优化方法的有效性与代谢通路优化工程的巨大潜力,同时提示这种优化方法适用于一系列次级代谢通路。

摘要：目的:构建一个随机序列八肽库并从中寻找非天然的具有药用价值的多肽。方法:利用基因工程技术构建随机序列八肽库,首先设计并合成了含8个密码子的随机寡核苷酸链,摸索了变性温度与时间、复性温度与时间、延伸温度与时间以及循环数后利用PCR扩增了这一片段,并解决了片段回收、连接等步骤,最后比较了不同的转化方法,采用最简便高效的TSS法转化大肠杆菌建立了随机序列八肽库。结果:利用作者所建立的随机序列八肽库应用于酵母双杂交系统并从中筛选到了一段感兴趣的多肽。结论:随机序列八肽库构建成功并且具有应用价值。

摘要：根据已报道的小鼠socs-1基因序列,依据大肠杆菌密码子偏爱性,设计并采用重叠PCR法合成了全长693bp的socs-1基因,将其克隆到表达载体pET-22b中构建表达载体pET-SOCS1。经IPTG诱导后,SDS-PAGE电泳显示此密码子优化后的基因可在大肠杆菌BL21(DE3)中高效表达。

摘要：将小分子干扰RNAs（siRNAs）传递至细胞内是其应用于临床治疗的关键障碍。设计了鱼精蛋白-抗体的融合蛋白传递siRNA至感染HIV或转染HIV胞膜的细胞。该融合蛋白（F105-P）设计为将鱼精蛋白编码序列连接到HIV-1胞膜抗体的重链Fab段的C末端。与F105-P相连的siRNAs仅在表达HIV-1胞膜的细胞内诱导基因沉默化。此外，针对HIV-1衣壳基因gag的siRNAs在受HIV感染但难以转染的初始T细胞中能抑制HIV复制。大鼠肿瘤内或静脉内注射与F105-P相连的siRNAs可靶向表达HIV胞膜的B16黑色素瘤细胞，对正常组织或胞膜阴性的B16细胞无此作用；注射与靶向c-myc、MDM2以及VEGF的siRNAs相连的F105-P可抑制表达胞膜蛋白的皮下B16肿瘤。另外，ErbB2单链抗体与鱼精蛋白融合可特异性地传递siRNAs进入表达ErbB2的肿瘤细胞。