摘要：为了评价HA蛋白S227N突变对基于新城疫病毒(NDV)载体的H7N9亚型禽流感疫苗免疫原性的影响,本研究向NDV载体携带的H7N9 HA蛋白中引入S227N突变,用反向遗传学技术拯救重组NDV,评价重组病毒的生物学特性与对鸡的免疫原性。结果显示,表达HAS227N的重组NDV的毒力弱(MDT>120 h),在鸡胚中的病毒效价高(HA效价:512;EID_(50):10^(9.3)/m L),复制性能较强,这些生物学特征与载体病毒及表达野生型HA蛋白的重组NDV相似。S227N突变不影响HA蛋白在重组NDV感染细胞中的表达。此外,表达HAS227N与野生型HA蛋白的重组NDV均能诱导产生较高的抗NDV血凝抑制(HI)抗体;HA蛋白S227N突变能够提高重组NDV免疫鸡的血清转化率,却不能显著提升针对H7N9的HI抗体效价。上述结果表明,HA蛋白S227N突变对基于NDV载体的H7N9亚型禽流感疫苗的免疫原性没有显著的增强作用。本研究对H7N9亚型禽流感疫苗的设计、优化与效力评估有参考意义。

摘要：参照GenBank上公布的鸽源Ⅵb亚型新城疫病毒JS/07/04/Pi株基因组全序列设计9对引物,RT-PCR扩增目的片段后,依次亚克隆至TVT7/R转录载体,成功构建出含JS/07/04/Pi株基因组全长cDNA的转录载体TVT/071204。然后将其与三个辅助表达质粒pCI-NP、pCI-P和pCI-L共转染BSR-T7/5细胞,60h后将转染细胞及其上清接种鸡胚,收集死亡鸡胚尿囊液进行HA与HI试验。结果显示死亡鸡胚尿囊液HA呈阳性,并能被ND阳性血清所抑制,表明该病毒已成功拯救,且拯救病毒rNDV/071204在细胞上的生长增殖能力同母本病毒相似。该病毒的成功拯救为鸽源Ⅵb亚型NDV感染的宿主特异性及鸽用ND新型疫苗的研究提供了理想的生物材料。