摘要：目的建立载体法筛选人巨细胞病毒（HCMV）截短UL54基因（UL54S）小干扰RNA（siRNA）靶位的体系。方法利用质粒pAVU6±27设计并构建2个小发夹RNA（shRNA）表达载体（psiUL54-1和psiUL54-2），与融合蛋白表达载体pUL54S-绿色荧光蛋白（EGFP）共转染AD293细胞，荧光显微镜观察融合蛋白荧光表达，RT-PCR法分析UL54SmRNA水平变化，流式细胞仪评价siRNA对融合蛋白的抑制作用，采用方差分析对流式细胞检测结果进行统计分析，筛选出有效的siRNA作用靶位。结果shRNA表达载体psiUL54—2与融合蛋白表达载体pUL54S-EGFP共转染AD293细胞48h后，pUL54S-EGFP、psiUL54-2共转染组EGFP表达量较pUL54S-EGFP、pAVU6±27共转染组下降；凝胶分析显示，psiUL54—2与pUL54S-EGFP共转染48h后，UL54S mRNA相对表达量为19．6，明显低于pUL54S-EGFP、psiUL54—1共转染组的96．6与对照组的100．0；psiUL54—1、pUL54S—EGFP共转染48h后对融合蛋白UL54S-EGFP表达无影响（P〉0．05），但psiUL54—2、pUL54S-EGFP共转染抑制融合蛋白UL54S—EGFP的表达（19．43×10^4±2．29×10^4比27．89×10^4±5．50×10^4，P＜O．01）。结论成功建立载体法筛选HCMV截短UL54S siRNA靶位体系，UL54S序列中1532～1550位点是有效的siRNA靶位点。