摘要：[目的]建立与优化送春与多花兰杂种ISSR-PCR的反应体系。[方法]用CTAB法提取送春、多花兰和送春×多花兰杂种的基因组DNA,针对ISSR-PCR扩增的体系中的Taq酶浓度、Mg2+浓度、dNTP浓度和引物的用量4个因素,进行L9(43)正交试验,用引物UBC827扩增两亲本的混合DNA,所得PCR产物在琼脂糖凝胶上检测,同时针对去离子甲酰胺对反应的影响进行初步对照试验。[结果]根据PCR产物的琼脂糖凝胶检测结果,由试验得到的最佳反应体系为:1×buffer、2.5 mmol/L Mg2+、0.6μmol/L引物0、.25 mmol/L dNTP、1 UTaq酶、0.4μl去离子甲酰胺5、0 ng模板DNA,总体积为20μl。[结论]该反应体系的建立为利用ISSR技术进行兰花遗传连锁图谱构建、基因定位、种质资源鉴定与分类等提供参考。

摘要：根据拟南芥(Arabidopsis thaliana)、水稻(Oryza sativa)、玉米(Zea mays)等物种的FIE序列的保守区域设计简并引物,以龙须草(Eulaliopsis binata)的花序为材料,抽提RNA,用RT-PCR的方法扩增到800 bp左右的片断,将其克隆到pGEM-T载体上并测序。结果表明该片断与已报道的玉米、高粱(Sorghum halepense)和水稻等FIE同源基因具有较高的相似性,为龙须草FIE基因特异片断。

摘要：以来自中国5个省份12个居群的龙须草为材料,通过锚定PCR开发复合SSR引物、数据库检索和近缘物种SSR引物的引用等3种方法开发龙须草的SSR引物。结果显示:在锚定PCR开发复合SSR位点所设计的33对引物中筛选到有效扩增引物13对,表现多态性的引物有6对;利用基因特异序列法得到多态性引物3个;所用18条同源物种引物中有83%的SSR引物在供试的12个龙须草居群中都有清晰的SSR条带,其中56%的引物表现出多态性。3种方法在龙须草12个居群中共筛选得到了19对多态性引物,多态性比率约为73%。利用筛选得到的SSR多态性引物对来自2个居群的杂交F1代进行检测,鉴别出只有母本带型的无融合生殖后代和具有双亲带型的杂交后代,在子代中还出现偏父本带型、亲本缺失带型和变异带型等,证明所开发的SSR引物可以揭示龙须草生殖方式的复杂性,适用于龙须草遗传分析及亲缘关系鉴定。