摘要：目的微血管单元是营养物质运输及血流动力学行为调控的关键场所,但体内微血管单元的研究常受限于伦理学、经济及技术等问题,构建体外微血管网络模型将有助于微血管相关病理生理行为的研究。方法该文以正常人眼底微动脉网络结构为模型,设计含有体内微血管网络特征的微血管单元模型;利用软光刻加工技术在体外构建出微血管网络模型,该模型具有不对称网络结构及微血管网络的分叉和侧支结构;在该体外模型上量化模型内微通道中细胞耗尽层(CDL)厚度以及红细胞分配。结果与结论所构建的体外微血管网络模型能够揭示体内微血管单元的血流动力学重要特征,包括CDL厚度、血细胞容积率和红细胞分配间的相互关系。该研究将为体外研究微血管内血流动力学及微血管系统疾病提供一种新的思路及技术手段。

摘要：目的:重组构建抑制多药耐药MDR1基因表达的shRNA真核表达载体,研究其对肝癌耐药细胞MDR1基因表达的抑制作用,以及对P-糖蛋白(P-gp)表达和功能的抑制作用.方法:根据MDR1基因序列,设计两段21个碱基的MDR1特异性靶序列作为shRNA目标序列(sh-MDR1-1,sh-MDR1-2),重组构建psh-MDR1表达质粒.采用脂质体介导转染肝癌耐药细胞SMMC-7721/R,用MTT法测定细胞对化疗药物阿霉素(ADM)的敏感性,流式细胞仪检测细胞膜表面P-糖蛋白(P-gp)表达和细胞内Rhdaming123(Rh123)的潴留.结果:PCR和DNA测序证实了psh-MDR1-1和psh-MDR1-2重组质粒的成功构建,均能有效地抑制细胞P-gp表达;转染细胞后均能够一定程度地恢复耐药细胞对化疗药物ADM敏感性,P-gp表达水平明显降低,细胞内的Rh123稳态积累量均明显增高;第1条序列更能有效的抑制MDR1基因表达.结论:体外完成shRNA RNAi载体的构建,能有效地逆转肝癌耐药细胞MDR1基因过度表达,抑制P-gp介导的多药耐药.从DNA载体产生的shRNA在肝癌耐药细胞内能诱导RNAi,能够序列特异性地抑制MDR1基因表达.

摘要：目的构建抑制多药耐药基因(MDR1)表达的短发夹RNA(shRNA)真核表达载体系统。方法根据MDR1基因已知序列,设计两段21个碱基的MDR1特异性靶序列,合成两对62nt并含有编码shRNA序列的寡核苷酸,双链退火后,克隆到经过BamHI和XbaI双酶切后线性PGE-1载体的U6启动子下游,重组构建RNA干扰(RNAi)质粒。结果对重新构建的pshRNA-MDR1载体经PCR扩增后行电泳分析,并对含有插入基因片段行测序分析。结果表明,62个碱基均成功插入到预计位点,并且序列完全一致。结论载体的成功构建为研究其对MDR1基因表达的抑制作用打下基础,同时使我们发展了在体内合成siRNA的方法。

摘要：目的　构建在哺乳动物细胞中表达MDR1短发夹RNA(shorthairpinRNA ,shRNA)的表达质粒 ,并初步探讨其对耐药肝癌细胞MDR1mRNA的抑制作用及抗肿瘤药物耐药性的影响。方法　根据Genbank中MDR1mRNA设计的两条多聚核苷酸序列 ,退火形成双链DNA ,再与经双酶切后的载体PGE 1连接 ,构建 pshRNA MDR1重组质粒 ,在脂质体的介导下转染肝癌细胞株BEL 74 0 2 /ADM ,RT PCR分析MDR1mRNA的表达 ,MTT法检测阿霉素对细胞的半数抑制浓度 (IC50 )。结果　PCR和DNA测序证实了表达质粒构建成功 ,并能明显地抑制BEL 74 0 2 /ADMMDR1mRNA的表达 ,对阿霉素的耐药指数降低了17.5倍 ( 2 99.2 / 17.1)。结论　构建的 pshRNA MDR1表达质粒能有效地抑制转染细胞MDR1mRNA ,从而提高肿瘤细胞的药物敏感性。

摘要：目的:构建含荧光素酶(luciferase,luc)基因的短发夹状RNA(short hairpin RNA,shRNA)表达质粒,并观察其在肝癌细胞Bel-7402中抑制外源荧光素酶的表达. 方法:设计的两条反向重复的多聚核苷酸序列,退火形成双链DNA,再与双酶切后的载体PGE-1连接,构建pshRNA-luc重组质粒,与荧光素酶基因表达质粒pCMV- luc共转染肝癌细胞株BEL-7402,检测其对荧光素酶表达的影响. 结果:PCR和DNA序列分析证实了重组质粒构建成功. pshRNA-luc对共转染的pCMV-luc中的荧光素酶具有明显的抑制作用,抑制率可达86%(P<0.01). 结论:构建的pshRNA-luc表达质粒能有效地抑制荧光素酶在肝癌细胞中的表达,为RNA干扰用于肿瘤的基因治疗打下基础.