摘要：本试验从湖北省分离到3株J亚群禽白血病病毒,并通过病理解剖、DF-1细胞培养和RT-PCR进行了鉴定,分别命名为HB1002、HB1003和HB1009。根据J亚群原型毒株HPRS-103序列设计引物,扩增gp85基因并测序。序列分析表明：基因片段大小均为921 bp,与预期一致;分离到的3株病毒之间核苷酸同源性在97.7%~99.7%,氨基酸同源性在95.1%~99.0%;与原型毒株HPRS-103核苷酸序列同源性在94.1%~94.8%;与其它ALV-J核苷酸同源性在87.6%~97.3%;进化树分析表明,分离到的3个毒株与JS09GY6同源性最近,在95.2%~97.3%。

摘要：采用鸭胚成纤维细胞培养从山东和北京两地暴发的鸭瘟临床病例中分离到两株鸭肠炎病毒(DEV),分别命名为SD和BJ。以单抗介导的间接免疫荧光(IFA)检测方法,对两个分离株感染细胞滴片进行间接IFA检测,可见感染细胞内有明显的蓝绿色荧光。试验感染7日龄北京鸭可引起鸭瘟的典型临床症状,死亡率为100(%3/3),取试验感染死亡鸭肝脏、法氏囊和脑组织等制备石蜡包埋切片,利用单抗进行免疫组化检验,除脑组织外均检测到病毒抗原。根据在GenBank上已发表的DEV两段序列设计两对引物,采用聚合酶链式反应(PCR)对野毒SD株人工感染鸭肝脏和BJ珠自然发病鸭肝脏病科提取核酸为模板进行扩增,得到预期大小为765 bp和1954 bp的目的片段,对长片段进行测序,与发表序列进行比较,毒株间的碱基序列同源性达到99.73%。

摘要：从湖北省武汉市某鸭场送检的死亡鸭肝脾中分离到1株病毒,结合流行病学调查、剖检变化等初步诊断为鸭瘟病毒感染。根据在GenBank上已发表的鸭瘟病毒TK基因序列AY963569设计引物,提取病毒核酸进行PCR扩增,得到预期大小为1 077bp的目的片段,经序列分析比较,与发表的鸭瘟病毒TK基因序列同源性达到99.16%。动物回归试验中感染雏鸭出现鸭瘟的典型临床症状,在透射电镜下观察到胸腺细胞中有与鸭瘟病毒颗粒的形态相符的病毒颗粒,上述结果表明分离的病毒为鸭瘟病毒。

摘要：经对部分发表在NCBI里的新城疫病毒序列进行比对，在其F基因上找到1段相对保守序列，根据保守序列设计1对引物和1条TaqMan探针，以新城疫I系疫苗株（Mukteswar株）作为标准品，通过系列条件优化、特异性、灵敏性和重复性试验，建立了一种灵敏度高、特异性强和重复性好的荧光RT-PCR检测新城疫病毒的方法。该方法能检测最低初始病毒浓度为10^2.2ELD50／mL，且在10^8.2～10^2.2ELD50／mL内Ct值与病毒浓度的对数值（1gELD50／mL）呈很好的线性关系，R^2达到0．9975；该方法对禽流感、禽痘病毒和禽大肠杆菌等禽病病原核酸无交叉反应；批间和批内重复性良好；临床样品检测中荧光RT—PCR与鸡胚分毒的符合率、诊断灵敏度和诊断特异性分别为98．5％，50．0％和98．4％。因此，荧光RT—PCR检测方法的建立为新城疫病毒检测提供了一种快速有效的方法，为新城疫病毒的研究奠定了一定的基础。

摘要：为了直观、原位且特异性的检测猪萨佩罗病毒(porcine sapelovirus,PSV)在感染仔猪后器官和组织中病毒核酸的分布,本研究根据GenBank中PSV的5′端非编码区基因的保守序列设计并合成1对引物,利用PCR地高辛探针合成的方法制备成原位杂交检测探针,建立了PSV原位杂交组织切片检测的方法。应用该方法检测PSV感染仔猪小肠组织,结果表明阳性信号主要存在与在于肠绒毛上皮细胞和固有层淋巴细胞中,阴性对照无显色。该方法可以用于组织切片中的PSV核酸的定位,为猪萨佩罗病毒在感染仔猪后器官和组织中病毒核酸分布及致病机理研究奠定基础。

摘要：根据已知禽流感病毒(Avianinfluenzavirus,AIV)核蛋白(NP)基因序列,选取其中保守区域设计出1对引物,以RT-PCR方法扩增出543bp的NP基因片段,采用地高辛标记制备探针。MDCK细胞人工感染H9N2亚型禽流感病毒后,不同时间取样制备细胞涂片,进行原位杂交,研究了禽流感病毒对MDCK细胞的感染,探讨了原位杂交的条件及其应用于检测AIV感染的可行性。结果显示,感染24h后,原位杂交可检测出细胞内的病毒RNA,并且杂交信号的强度与感染时间的长短有关。研究表明,原位杂交检测禽流感病毒,不但能很好地表现病毒和细胞的位置关系,而且具有较好的特异性和灵敏性,为禽流感病毒的组织原位杂交检测奠定了实验基础。

摘要：为了对早期猪轮状病毒(porcine rotavirus,PoRV)感染情况进行监测,根据GenBank中已有的A型PoRV VP6序列,设计2对引物和荧光定量探针,建立了TaqMan荧光定量RT-PCR方法,并对该方法特异性、灵敏性和重复性进行评价。结果显示所建立的TaqMan荧光定量RT-PCR方法特异性强、重复性好、灵敏度高,可检测到101拷贝/μL。经对2366份腹泻仔猪的粪便样品进行检测,所建立的方法检出率(5.92%,140/2366)高于常规RT-PCR(4.95%,117/2366),两者的符合率为98.58%。结果表明,本研究建立的PoRV TaqMan荧光定量RT-PCR方法可用于猪轮状病毒病的临床检测。

摘要：为了建立一种可同时检测并鉴别猪繁殖和呼吸综合征病毒(PRRSV)、猪链球菌(SS)和猪多杀性巴氏杆菌(Pm)多重TaqMan荧光定量PCR检测方法,本试验通过MEGA7.0分析NCBI上已登录的3种病原体基因序列,分别根据PRRSV的ORF6基因、SS的GDH基因和Pm的KMT1基因设计出特异性引物和探针,并对反应条件进行优化。结果显示,该方法能够特异性地检测PRRSV、SS和Pm,对其他病原无交叉反应;对PRRSV、SS和Pm的最低检测浓度分别为9.93×10^(2)、1.10×10^(2)和1.07×10^(2)拷贝/μL;组内和组间变异系数均小于1.85%。结果表明,该方法特异性强、灵敏性高、稳定性好,可应用于临床检测。