摘要：ＮＯ合酶抑制剂能阻断或逆转μ、δ激动剂耐受和戒断反应，而对κ激动剂无明显作用，其药理效应类似于阿片成瘾治疗的常用药物可乐定。甲基兰抑制鸟苷酸环化酶活性，使ｃＧＭＰ生成减少，对阿片类药物耐受和戒断症状均有阻断作用，提示ＮＯｃＧＭＰ通路在阿片耐受和依赖发生中起重要作用，为寻找和设计治疗阿片类耐受成瘾的药物提供新的策略。

摘要：将大鼠脑原生型一氧化氮合酶（cNOS）全长cDNA定向插入pRC／CMVpolylinker区，获得真核细胞表达载体pCMVcNOS。以pCMVcNOS为模板，cNOS内部基因序列设计的引物进行PCR扩增，证明cNOS基因的存在。经酶切检测进一步证实插入方向完全正确。用磷酸钙共沉淀法和LipofectinTM法将pCMVcNOS转染NG108-15细胞，用含600mg／LG418培养基筛选和增殖抗性单克隆细胞，通过3H-精氨酸转化3H-胍氨酸法测定各细胞克隆可溶相和颗粒相cNOS活性，筛选高效稳定表达的细胞株。从42株抗G418单克隆细胞林中筛选到3株稳定高效表达细胞，在表达的cNOS活性中，可溶相增加更为明显。本实验结果证实，得到高效表达原生型一氧化氮合酶的神经细胞株。

摘要：采用分子克隆技术，设计并构建来源ＲＡＷ２６４．７巨噬细胞ｉＮＯＳ基因ｃＤＮＡ的真核表达载体。以ＨｉｎｃⅡ＋ＮｏｔⅠ双酶解ｐＫＳｉＮＯＳ，电泳回收３９７３ｂｐ编码ｉＮＯＳ的ｃＤＮＡ序列，克隆入真核表达载体ｐＲｃ／ＣＭＶ的ＨｉｎｄⅢ和ＮｏｔⅠ位点。用ＥｃｏＲⅠ和ＳａｌⅠ酶切鉴定，初步筛选２＃和８＃克隆为重组子ｐＣＭＶｉＮＯＳ。经ＮｏｔⅠ和ＫｐｎＩ＋Ｓａ１Ⅰ酶切结果表明，重组克隆外源ｉＮＯＳ基因插入位点和片段大小正确。以ＥｃｏＲＶ＋ＸｂａⅠ、ＥｃｏＲＶ＋ＳｃａⅠ、ＢａｍＨⅠ＋ＸｂａⅠ或ＢａｍＨⅠ＋ＢｇｌⅡ双酶切图谱分析，均证明ｉＮＯＳ基因正向插入真核表达载体。用ｉＮＯＳ基因特异性引物，ＰＣＲ分析质粒ｐＣＭＶｉＮＯＳ，扩增出４５１ｂｐ片段，提示重组质粒含有ｉＮＯＳ基因序列。ｐＣＭＶｉＮＯＳ特点是携有ｉＮＯＳ的ｃＤＮＡ序列，包括编码ｉＮＯＳ开放阅读框架，但删除５＇端部分非编码区，有利于高效表达。还含有巨细胞病毒强启动子、ｐｌｏｙ（Ａ）加接信号和ｎｅｏ标志基因，具有转染多种哺乳类细胞通用性。因此，重组表达质粒ｐＣＭＶｉＮＯＳ的构建可望为研究ｉＮＯＳ基因真核表达调控，阐明ＮＯ／ｉＮＯＳ调节神经、心血管和免疫系统的分子机理?