摘要：目的　在细胞水平上 ,利用研制的SARS病毒全基因组芯片技术探讨人重组干扰素α2b抑制SARS病毒复制的分子机制。方法　根据已经发表的SARS病毒基因组全序列和生物信息学软件分析 ,设计包括SARS病毒全基因组的各个可能编码区的PCR引物 ;将所有PCR产物用来制备SARS病毒的全基因组cDNA芯片。利用该芯片来探讨人重组干扰素α2b抑制SARS病毒复制的分子基础。结果　通过PCR方法研制了SARS病毒全基因组的cDNA芯片 ,并说明cDNA芯片可以准确地检测SARS病毒各个基因的RNA水平。利用这一技术研究了干扰素抗SARS病毒的分子机制。结果表明 ,人重组干扰素α2b可以明显抑制SARS病毒复制过程中几乎所有病毒RNAs的转录 ,并呈现一定的剂量关系 ;并发现一个目前还没有确定功能的SARS病毒新基因 ,命名为U基因 ,转录最早 ,转录水平最高 ,对干扰素的抑制作用也很敏感 ;它可能在病毒的转录复制过程中发挥重要作用。结论　SARS冠状病毒cDNA芯片可以用来研究病毒复制的分子机制以及相关抗病毒药物包括干扰素的研究。本文在分子水平上研究了人干扰素α2b抑制SARS病毒复制的基因转录动态 。

摘要：目的通过分析GenBank中丙型流行性感冒(流感)病毒的序列,建立丙型流感病毒实时荧光定量-反转录聚合酶链反应(rRT-PCR)检测方法,并制备丙型流感病毒的RNA标准品。方法下载GenBank中丙型流感病毒的序列,使用Beacon Designer 8软件在保守区域设计特异性引物和TaqMan荧光探针。人工合成病毒HE、NP、MP和NS基因序列,克隆到pBluescriptⅡSK(+)质粒载体,进一步通过体外转录获得RNA模板,并验证检测方法的检测极限值和特异性。结果建立了针对丙型流感病毒HE、NP、MP和NS基因的快速、可靠的实时荧光定量RT-PCR检测方法,同时制备了RNA标准品。结论本文建立的丙型流感病毒实时荧光定量RT-PCR检测方法,可以在日常监测和临床鉴定中快速、准确地检测丙型流感病毒。

摘要：目的建立快速检测A（H3N2）亚型流行性感冒病毒（简称流感病毒）神经氨酸酶（NA）基因E119V奥司他韦耐药突变位点的双重实时荧光定量逆转录PCR（rRT—PCR）方法。方法由GenBank获取2000--2012年A（H3N2）亚型流感病毒NA基因序列26条，据此设计特异性靶向NAE119V突变位点的TaqMan—MGB探针进行双重rRT—PCR反应，并利用耐药参考株、临床分离株进行敏感性、特异性和重复性评价。结果建立了快速检测NA基因E119V位点的双重***检测方法。本方法在A（H3N2）病毒（HA=8）稀释度至10。仍可检测到荧光信号，病毒滴度的对数与ct值之间呈线性相关，具有较高的灵敏度；与无耐药突变的A（H3N2）流感病毒及其他呼吸道病毒均无交叉反应，两条TaqMan—MGB探针之间不存在交叉反应，具有很高的特异性，并能够检测耐药株和敏感株混合病毒中的耐药突变，在较高浓度的混合病毒中对耐药突变的检测限是5％，在低浓度混合病毒中的检测限是50％。重复性试验得到H3N2—119E和H3N2—119V两组探针批内平均变异系数（CV）值分别为2．32％和0．57％，批间CV值分别为1．77％和0．97％，具有较好的重复性。对其中20株病毒的NA基因序列进行分析，证实这些毒株的NA基因119位点均为谷氨酸（E），表明本研究设计的方法与序列测定结果一致。结论建立了基于TaqMan—MGB探针检测A（H3N2）亚型流感病毒E119V耐药突变的双重rRT—PCR方法，该方法灵敏、特异、重复性好，实验过程和结果判读简单易操作。