摘要：应用PCR技术检测江苏徐州地区三带喙库蚊Culex tritaeniorhynchus蚊胃血来源，研究其吸血习性。根据三带喙库蚊可能吸血对象（猪、人、牛、羊、鼠、鸡）的线粒体DNA细胞色素b序列的差异，设计种特异引物，建立聚合酶链反应（PCR）体系鉴定三带喙库蚊胃血来源。同时，用该方法检测猪血、人血、牛血、羊血、鼠血、鸡血中提取的DNA，验证其特异性；对吸饲人血后不同时间（1、12、24、36、48、60h）的中华按蚊进行检测，测试该方法的敏感性。该方法可从已知动物血样提取的DNA中分别扩增得到689（人）、561（牛）、453（猪）、225（羊）、485（鼠）、266bp（鸡）大小的特异性条带；吸人血36h内的中华按蚊均能扩增出特异性条带，在吸人血后48、60h的中华按蚊中，均未扩出特异性条带。共检测24只现场三带喙库蚊，血源来自猪、人、鸡、牛、鼠、羊分别为7、6、3，2、2、1只，其中5只蚊虫兼吸吸血。建立的PCR检测方法可鉴定三带喙库蚊蚊胃血来源，结果稳定可靠；徐州地区三带喙库蚊不仅嗜吸猪血和人血，也可兼吸其他动物血。

摘要：本研究建立了一种简单、快速、准确的寨卡病毒可视化逆转录环介导等温扩增(RT-LAMP)检测方法。在线设计3套LAMP引物,利用实时浊度仪筛选最佳引物,加入羟基萘酚蓝,评估可视化RT-LAMP检测方法的灵敏度和特异性。建立的可视化RT-LAMP方法可检测的最低浓度为101copies/μL,高于普通PCR和荧光定量PCR 1~2个数量级;同时,该方法不与其他虫媒病毒产生交叉反应。该方法可为虫媒监测和临床诊断提供实验依据。

摘要：目的了解海南省海口地区白纹伊蚊携带伊蚊黄病毒情况。方法 2019年6-10月,用人诱法在海口采集白纹伊蚊,设计特异性引物扩增伊蚊黄病毒部分基因片段并测序;用Mega7.0软件对所得病毒核酸序列和GenBank中已知伊蚊黄病毒参考序列进行遗传进化关系分析。结果共采集165只白纹伊蚊。用优化确定1对特异性引物从1只白纹伊蚊中扩增到伊蚊黄病毒HK1,白纹伊蚊带毒率为0.6%。系统发育分析发现伊蚊黄病毒HK1序列与分离自日本东京的病毒株(NC012932.1)遗传关系最近,相似度为72.51%,但小于84.0%。根据黄病毒属定义新种的标准,这株伊蚊黄病毒(HK1)为黄病毒属的新种。结论在海口地区首次发现白纹伊蚊携带伊蚊黄病毒,应增加样本量持续开展蚊虫携带病原体监测。

摘要：为监测东南沿海舟山地区蝙蝠携带轮状病毒的流行情况,探索其流行机制,2015—2018年,在浙江省舟山地区采集蝙蝠,以蝙蝠肠组织为模板,设计针对轮状病毒VP3序列的特异引物进行RT-PCR检测。结果显示,2015年采集的65只蝙蝠,轮状病毒阳性率为6.15%(4/65),2016年采集的48只蝙蝠,阳性率为2.08%(1/48),2017年采集的70只蝙蝠,阳性率为2.86%(2/70),而2018年采集的101只蝙蝠,未检测到轮状病毒序列。针对2017年小菲菊头蝠Rhinolophus hipposideros体内发现的一株轮状病毒进行基因组扩增,获取部分基因组序列并进行生物信息学分析,发现VP7基因序列与蝙蝠源轮状病毒相似度最高,同源性为96%;VP3基因序列与人源轮状病毒同源性为90%;VP6基因序列与猫同源性为95%。根据上述结果,我们推测舟山蝙蝠来源轮状病毒是一株重组病毒株,具有潜在跨种传播给人类的可能性。本研究系首次在东南沿海舟山地区蝙蝠体内检测到轮状病毒,对该地区轮状病毒的监测和预警具有一定的公共卫生意义。

摘要：目的了解海南省三亚地区蚊虫携带细胞融合病毒现况。方法在2018-2019年蚊虫活动高峰期采集三亚地区蚊虫,前期运用高通量测序的方法获得了1份细胞融合病毒核酸序列,本研究根据已测序结果设计特异引物,通过RT-PCR扩增伊蚊细胞融合病毒目的片段及测序,检测蚊虫携带的细胞融合病毒阳性率,运用MEGA 7.0软件对所得病毒基因核酸序列与Genbank中已知细胞融合病毒参考序列进行遗传进化分析。结果共采集290只蚊虫,其中从224只白纹伊蚊中仅扩增得到1份细胞融合病毒(CFAV-NS3-SY1),致倦库蚊(26只)和三带喙库蚊(40只)均未检测到该病毒,蚊媒活动高峰期蚊虫带毒率为0.34%。该病毒NS3基因系统发育分析发现CFAV-NS3-SY1与分离自法国马赛的病毒株(AF411835)遗传关系最近,相似度为99.84%,因此可以将这株病毒界定为白纹伊蚊细胞融合病毒。结论三亚地区白纹伊蚊携带细胞融合病毒,应增加样本量持续开展蚊虫携带病原体监测。

摘要：目的研制一种水生昆虫卵、幼虫、蛹的采集装置,并应用于实际工作。方法基于负压原理,研制水生昆虫卵、幼虫、蛹的采集装置,主要部件包括连续收集瓶、吸蚊管等。结果成功研制了水生昆虫卵、幼虫、蛹采集器,由手柄、连续采集管、负压系统组成。采样器尺寸:45 cm×12 cm×6 cm,重量350 g,电池电压12 V,连续工作时长20 h,累积收集水量500 L。实验室条件下,10、20和30 s在不同幼虫(蛹)密度的合计采集率分别为39.2%、69.0%和93.8%。在白纹伊蚊、埃及伊蚊、淡色库蚊、三带喙库蚊孳生地现场进行卵、幼虫、蛹采集试用,实现了高效可连续采集。结论该采集装置设计合理,实用性强,提高了媒介昆虫现场采样的工作效率。

摘要：汉坦病毒(hantavirus,HV)属汉城病毒S4亚型(Seoul virus-S4 subtype,SEOV-4)是东南沿海地区的主要HV流行亚型,目前尚缺乏快速诊断检测方法。本研究基于酶切探针等温扩增技术(Enzymatic Probe Isothermal Amplification,EPIA),以SEOV-S4较为保守的S序列为靶序列设计引物和探针,建立了一种快速检测SEOV-S4的方法。用靶基因合成质粒梯度稀释进行灵敏度和重复性验证,并用人源其他亚型HV进行特异性验证,结果显示,基于EPIA的SEOV-S4检测方法灵敏度可以达到10 copies/μL,且与人源其他亚型HV无交叉反应。结果表明,本研究建立的检测方法具有良好的敏感性、特异性和重复性,可用于相关样本的诊断与筛查。