摘要：采用响应面分析法对发酵性丝孢酵母菌株以木薯淀粉水解液为原料合成微生物油脂的培养条件进行优化。首先利用Plackett-Burman试验设计确定影响油脂产量的主要因素,在此基础上再利用Box-Behnken试验设计及响应面分析法对其进行条件优化。结果表明,发酵温度、C/N、pH对油脂产量具有显著影响,产油脂的最佳发酵条件为:发酵温度28.78°C、C/N 126.18、pH 6.69,油脂产量达到14.88g/L,比优化前提高了28.6%。同时,气相色谱分析表明,微生物油脂脂肪酸组成成分主要包括棕榈酸、硬脂酸、油酸、亚油酸酯等,是优良的生物柴油制备原料。

摘要：[目的]构建EV71 P1和3CD基因的双元植物表达载体,通过农杆菌注射渗透法实现在生菜叶片中的瞬时共表达。[方法]根据Gen Bank序列,设计合成EV71 C4亚型P1和3CD基因,分步克隆入植物表达载体p CAMBIA2301,并转化农杆菌LBA4404。农杆菌注射渗透法对意大利生菜叶片进行遗传转化,固相酶联斑点实验和免疫印迹实验检测感染叶片总蛋白提取物,分析外源基因表达效果。[结果]限制酶切验证获得共表达植物表达载体p CAMBIA2301-P1-3CD。感染叶片的外源基因表达产物中具有抗VP1抗体结合活性的蛋白,其分子量约39 k Da。[结论]成功构建EV71 3CD和P1基因双元植物表达载体,其在意大利生菜叶片中的表达产物具有免疫反应性。为利用植物生物反应器生产抗EV71口服疫苗提供了理论和实验依据。

摘要：以意大利生菜(Lactuca sativa *** Hort.)为试材,农杆菌LBA4404叶盘法转化子叶,通过植物组织培养技术,筛选获得再生体系最佳选择压为Kan 50 mg/L,最佳抑菌剂为Carb 400 mg/L,生菜子叶抗性愈伤组织诱导的最佳植物生长调节剂条件为6-BA 0.4 mg/L+NAA 0.15 mg/L或6-BA 0.3 mg/L+NAA 0.2 mg/L,其中在6-BA 0.3 mg/L+NAA 0.2 mg/L的培养基上诱生的抗性愈伤组织后续生芽效果较好。根据GenBank序列,优化设计合成适合植物表达的肠道病毒71型(Human enterovirus 71,EV71)C4亚型P1和3CD基因,运用基因重组技术,同时克隆入植物表达载体pCAMBIA2301,构建共表达植物表达载体pCAMBIA2301-P1-3CD。以农杆菌介导的叶盘法转化意大利生菜子叶,对叶片PCR阳性的抗性株进行蛋白质表达检测,Western-blot实验表明,两株抗性株叶片中表达出具有生物学活性的EV71抗原蛋白质,证明了利用生菜表达EV71抗原的可行性,为利用植物生物反应器生产抗EV71口服疫苗提供了理论和实验依据。