摘要：本研究参考非洲猪瘟病毒(ASFV)国内分离株SY18株的EP402R基因(编码CD2v蛋白),优化其序列,设计特异性引物扩增。将去除跨膜保留胞外区或胞内区的两种截短体克隆到原核表达载体p ET-28a中,再转化至大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞。经IPTG诱导,铁蛋白融合CD2v胞外区(CD2vN-Fe)和铁蛋白融合CD2v胞外-胞内区(CD2v-NC-Fe)均获得高效表达。以该融合蛋白为抗原免疫BALB/c小鼠制备多克隆抗体,通过酶联免疫吸附实验(ELISA)和间接免疫荧光(IFA)方法检测其灵敏度和特异性。结果表明:CD2vN-Fe多抗特异性较强。本研究为建立ASFV的血清学鉴别检测方法奠定了基础。

摘要：目的:构建重组人PCNA突变体(mutant PCNA,mPCNA)的真核表达质粒,并建立稳定高表达该目的蛋白的宫颈癌细胞系Hela,为进一步研究PCNA在DNA损伤修复中重要的生物学功能奠定基础。方法:将含有定点突变的PCNA cDNA序列克隆到T栽体中,然后再亚克隆到真核表达栽体pCDNA3.1/V5-His A上,构建真核表达载体质粒pCDNA3.1/V5-His A-mPCNA,稳定转染到Hela细胞中;Western B1otting法检测蛋白的表达情况;白细胞记数法测定细胞的生长速率。结果:真核表达质粒pCDNA3.1/V5-His A-mPCNA经酶切、测序分析与实验设计的序列完全一致;稳定建系后,Western Blotting结果显示在相应位置可见清楚的目的条带;稳定高表达mPCNA的细胞系与野生型细胞相比两者的生长速率基本一致。结论:成功构建了真核表达质粒pCD- NA3.1/V5-His A-mPCNA;建立了稳定高表达该突变体的Hela细胞系;PCNA突变体的高表达不影响Hela细胞的正常生长。

摘要：为探讨油页岩矿山开采加工过程中产生的油页岩残渣环保利用的新途径,在油页岩残渣改性的基础上,研究了其对有机污染物苯胺的吸附作用。利用NaOH对油页岩残渣进行改性,设计正交试验优化了改性油页岩残渣吸附苯胺的最佳条件。其试验结果表明:在改性油页岩残渣粒径为0.01 mm、振荡速度为100 r/min、改性油页岩残渣用量为2 g/100 mL、温度10℃、pH7、吸附时间为40 min的最优化条件下,对初始质量浓度为20 mg/L苯胺的去除率可达83.92%。同时,绘制了改性油页岩残渣吸附苯胺的吸附等温性,其吸附过程与Langmuir和Freundlich吸附等温线拟合。

摘要：目的:克隆表达2型猪链球菌N-乙酰氨基葡糖-6-磷酸脱乙酰酶(NagA)的编码基因,并测定其酶活性。方法:根据GenBank中05ZYH33基因组序列设计引物,PCR扩增NagA(SSU05_1259)基因,将其克隆到pET28a载体中,构建重组质粒pET28a:NagA,转化至大肠杆菌BL21,筛选阳性转化子进行IPTG诱导表达,产物通过SDS-PAGE与质谱鉴定;利用Ni亲和层析柱对表达产物进行纯化,获得NagA重组蛋白后测定其酶活性。结果:在大肠杆菌中高效表达了NagA基因,重组表达的Nag A相对分子质量约为43×10~3,其酶促反应最适温度为37℃,最佳反应时间为30min,最适反应pH值为7.5,最佳底物浓度为13mmol/L。2型猪链球菌NagA的体外酶活为124U/mL,酶比活为78U/mg。结论:在原核系统中表达了NagA基因,获得的NagA蛋白具有良好的酶学活性。

摘要：目的探讨老年患者住院期间跌倒的常见原因,制定相应的预防护理对策。方法应用自行设计的调查表通过回顾性调查3年中本病区跌倒患者的各种记录,收集跌倒患者的一般资料、跌倒的危险因素、跌倒发生时相关情况、跌倒后果等。结果本调查中有11人跌倒,其中男9例,女2例,年龄79.7±6.2岁,过去1年有跌倒史的4例,脑卒中后遗症致偏瘫1例。跌倒多数发生在室内,其次为厕所,时间分散,但多数集中在早上6:00-7:30、中午11:00-14:00和夜间1:30-2:00。2例患者发生损伤,平均住院日为28.5 d。结论老年病人跌倒原因复杂,年龄、疾病、药物、心理、跌倒史等因素均有重要影响,护理中要做好高危人群的评估和健康宣教,为患者提供安全的住院环境。

摘要：目的对杭州市一起农村登革热暴发疫情开展调查与分析,为制订农村登革热防控措施提供科学依据。方法采用描述性流行病学方法分析2018年9月杭州市农村一起登革热的流行病学特征;采集患者血清进行登革病毒核酸和抗体检测,提取病毒核酸后扩增E基因并测序,构建进化树;采用布雷图指数(BI)法进行蚊媒密度监测。结果该起疫情共报告登革热本地病例13例,罹患率为0.13%;其中,发病年龄最小30岁,最大79岁,以50岁以上人群为主;职业分布以农民居多。5株登革病毒株经序列分析,均属登革病毒1型,与泰国和缅甸等东南亚国家登革病毒1型同源性高。结论该起农村登革热本地暴发疫情由登革病毒1型引起,传染源可能来自东南亚国家,相关部门应进一步加强登革热输入病例监测。

摘要：目的设计编制1套全面及适合国情的无偿献血行为自评量表,为献血研究提供工具。方法根据无偿献血中取得经验及相关数据,参照有关文献,筛选出20个题目,含献血认知、献血前情绪、献血感知3个因子。调查参加无偿献血的部队官兵及高校学生120人,有效答卷117份,求取相关数据,并对首次及2次以上献血等进行比较研究。结果取得了诸条目和因子的相关数据,均可供评估分析;无偿献血者的主要心理为焦虑。结论编制的自评量表可对献血者心理状况进行评估分析,并为无偿献血筛选血源及心理咨询等提供参考。

摘要：为制备和筛选副猪嗜血杆菌(HPS)具有免疫保护效力的抗原因子重组蛋白,本研究根据GenBank中已登录HPS基因序列,设计引物,分别克隆其OapA、Hps0675(包括全片段和2个子片段)、Hsp60、OmpP2、HbpB、GAPDH、Hps06257和D15抗原因子的10个基因片段,分别将其克隆入pET28a质粒构建重组表达质粒并转化大肠杆菌BL21经IPTG诱导表达。SDS-PAGE检测结果显示,除OapA外,其他9个重组蛋白均正确表达,其表达量占菌体总蛋白的10.20%~31.90%。除rGAPDH以可溶性和包涵体两种形式表达外,其他8个重组蛋白均以包涵体形式存在。Western blot鉴定结果显示,rHbpB、rD15、rHps06257反应原性最强,rGAPDH、rHsp60、rOmpP2反应原性中等,r Hps0675-1、r Hps0675-2、rHps0675反应原性最弱。以His标签蛋白纯化试剂盒纯化后,9个重组蛋白的纯度在90.72%~98.72%,浓度在1.082 mg/mL~7.936 mg/mL。本研究实现了HPS 9个重要抗原因子的克隆表达和纯化,首次在相同条件下对其反应原性进行了对比分析,为其亚单位疫苗候选保护性抗原蛋白的筛选奠定基础。

摘要：【目的】开发一种拉绳式电子测径尺,以解决围测类测径仪器因柔性尺面宽度而影响测量精度的问题,同时实现林木胸径外业数据的高效采集和内业高效记录。【方法】基于经典围测原理,以钢绳、卷盘、无刷直流电机和光电编码器为主要结构,研发了拉绳式电子测径尺。以钢尺测得的样木圆盘直径(8个方向测量)均值作为真值,利用拉绳式电子测径尺、柔性尺面电子测径尺、围尺和卡尺(2个方向测量),分别测量了20个近似圆形胸高圆盘(规则圆盘)的直径和20个不规则胸高圆盘的直径,比较各仪器测径的方差、准确度和t检验结果;用4种仪器分别测量7号样木规则圆盘直径和27号样木不规则圆盘直径,连续测6次,比较各仪器测径的精密度;用4种仪器分别测定10个规则圆盘和10个不规则圆盘的直径,记录平均耗时,比较各仪器的测径效率。【结果】拉绳式电子测径尺、柔性尺面电子测径仪、围尺和卡尺测量规则圆盘直径的准确度分别为0.045,0.205,0.115和0.140 cm,精密度分别为0.017,0.067,0.067和0.200 cm,方差分别为33.267,33.401,33.532和33.443;测量不规则圆盘直径的准确度分别为0.120,0.295,0.205和0.280 cm,精密度分别为0.058,0.092,0.067和0.350 cm,方差分别为22.525,22.908,22.611和21.607;测径平均耗时分别为6.9,7.5,7.7和13.9 s。【结论】拉绳式电子测径尺的测量精度和测径效率均优于柔性尺面电子测径仪、围尺和卡尺,不仅可满足森林资源连续清查和森林资源规划设计调查的精度要求,还能大大缩减外业测量和内业录入的成本。