摘要：建立了柑橘叶斑驳病毒(citrus leaf blotch virus,CLBV)的RT-LAMP(Reverse transcription loop-mediatedisothermalamplification)检测方法,并对其灵敏度和准确性进行验证。根据CLBV的外壳蛋白序列设计引物,筛选出特异性较好的一组引物,进行扩增时间及温度等条件优化。优化后反应体系可在65℃条件下,60 min内完成扩增。所建立体系特异性好,灵敏度高,最低可从23.2 pg·μL^-1的模板中检测出CLBV,扩增结果可通过加入SYBRgreenⅠ染料方法直接观察。用RT-LAMP方法对田间采集的120份柑橘样品进行检测,不同来源样品检出率在0~15%之间,与普通RT-PCR方法检出结果一致。

摘要：【目的】为了建立柑橘黄龙病菌亚洲种LAMP快速检测方法。【方法】根据黄龙病菌亚洲种外膜蛋白基因,在种属特异保守区域的6个位点设计2对特异性引物,对反应条件和体系进行优化,并通过产物沉淀观察和SYBRGreen I荧光染料显色的方法来快速判读检测结果。同时对田间样品进行了特异性和灵敏度分析试验。【结果】该方法仅需63℃反应70 min即可得到结果,特异性强,灵敏度高。对柑橘常见病害样品进行LAMP扩增,仅HLB阳性样品扩增产物电泳呈特征性梯状条带。检测灵敏度比常规PCR高100倍,与实时定量PCR相当。在对105份黄龙病田间疑似样品检测中,LAMP阳性检出率为52.4%,常规PCR为37.1%,2种检测方法符合率为84.7%。【结论】建立的黄龙病菌亚洲种LAMP检测方法,快速简便、特异性强、灵敏度高,为快速检测柑橘黄龙病提供了新方法和新思路。