摘要：本文设计并化学合成了一对ＰＣＲ引物，以人ＣＤ４ｃＤＮＡ为模板，成功地扩增出人ＣＤ４Ｎ端两个结构域的编码基因（６００ｂｐ），并在此基因两端分别插入了ＥｃｏＲＩ和ＨｉｎｄⅢ酶切位点及起始和终止码。通过ＥｃｏＲＩ和ＨｉｎｄⅢ双酶切位点将ＣＤ４基因克隆入ｐＵＣ１９质粒，经过ＰＣＲ和酶切鉴定得到ＣＤ４重组克隆ｐＴ４０３。ＤＮＡ序列分析结果表明，所克隆ＣＤ４基因与已发表的人ＣＤ４基因序列完全一致。

摘要：作者设计并合成了一对突变引物PGO1和PGO2,分别在两引物中设计了两个突变点,使突变后基因含有EcoRI、BamHI和ATG及TAA序列,以便于HlV-1gag基因序列的定向克隆和表达。用PCO1和PGO2作引物,采用PCR方法从HIV-1基因组DNA中扩增出一个长504bp的DNA片段,用EcoRl和BamHI双酶切位点将此片段定向克隆入pUC19质粒。将克隆基因插入M13mp18进行DNA序列分析,结果表明,该基因序列及读框完全正确,且在其5′末端突变出EcoRI位点和ATG起始码,3′末端突变出TAA终业码和BamHI位点,从而为该基因的表达研究奠定了基础。

摘要：为了检测牙龈炎组织中ＩＬ－１的表达，设计合成了扩增人ＩＬ－Ｉａ基因的引物，用ＲＴ－ＰＣＲ技术从牙龈炎组织ＲＮＡ中扩增了ＩＬ－Ｉα基因，而正常牙龈中扩增不到该产物。将扩增片段克隆后进行了部分序列的测定，结果表明ＰＣＲ方法可以简便，快速，特异，灵敏地检出炎症组织中ＩＬ－１的表达，这对于牙龈炎发病机理及治疗的研究具有重要意义。

摘要：为了提高人白细胞介素-3(hIL-3)在大肠杆菌中的表达,在计算机辅助下,设计合成了PCR突变引物,用于改造起始密码AUG上下游序列,并在不改变5＇端氨基酸编码的前提下,尽可能选用大肠杆菌高频使用的密码子。将经改造后的hIL-3cDNA和翻译起始区置于P_L启动子之下,转入大肠杆菌Tap106,经42℃热诱导后,获得表达产物,提高表达水平近一倍,表达量达到菌体总蛋白量的30％左右。表达产物经Western blot验证,经PVDF膜转移后进行N端顺序分析,证明前15个氨基酸正确,产物经包涵体纯化后,纯度提高至80％以上,初步复性后能明显促进hIL-3依赖细胞的生长。

摘要：0 引言传统RT-PCR方法需要用反转录酶将RNA先反转录成cDNA，然后用Taq酶对cDNA进行PCR扩增，而且往往需要巢式PCR扩增才能提高结果的特异性和灵敏度，操作比较麻烦. 有人发现Taq DNA聚合酶有一定的反转录活性［1］，可以实现只用Taq DNA聚合酶进行反转录的单反应管一步法RT-PCR扩增. 但是我们在实验过程中发现，利用Taq DNA聚合酶进行一步法RT-PCR反应成功率往往不高，这可能是因为Taq DNA聚合酶的反转录活性不高的原因造成的. 为此，我们重新设计了实验方法，以提高用Taq DNA聚合酶进行RT-PCR的成功率.

摘要：本文报道借助于微机分析设计并合成了2个引物,通过聚合酶链反应插入突变法扩增出含有4个功能区(T肽区,与NLK部分同源区,显性中和位点及与CD4结合区)的HIV-env282肽基因,其5′端连有EcoR Ⅰ酶切位点和翻译起始码,3′端与终止码和BamH Ⅰ酶切位点相连。通过基因重组将其插入到大肠杆菌表达载体pBV220内并转化至宿主菌DH5α中,经电泳初筛、酶切分析和PCR鉴定,确定了一株含目的基因的重组菌,称之为pXW1。

摘要：目的通过聚合酶链方法,以特异引物,从感染人乳头瘤病毒的新鲜食管癌组织获得人乳头瘤病毒16型晚期表达基因L_2保守区线性抗原片段的基因,并体外表达。获得具有抗原活性的原核表达蛋白,以探索研制低廉,方便及准确的人乳头瘤病毒感染的新型诊断试剂。方法在前人研究的基础上,经计算机检索,选定与食管癌高度相关的人乳头瘤病毒16型晚期表达基因L_2N端的一段基因,采用特异引物及聚合酶链方法从多例人乳头瘤病毒感染的食管癌组织DNA模板中,获得人乳头瘤病毒16型晚期表达基因L_2保守区线性抗原片段的基因,经克隆入测序载体验征DNA大小及序列后,将HPV16 L_2 DNA保守区线性抗原基因片段克隆入高效原核表达载体,并在大肠杆菌中表达,初步以Western-blot测定表达产物的抗原性:与乳头瘤病毒抗体及感染者血清的反应活性。结果以我们设计的特异引物,从两例人乳头瘤病毒感染阳性的食管癌组织DNA模板中能得到预期大小的PCR产物,并能插入预定的克隆载体中测序,所得基因的序列符合目的基因的序列,且两例组织所得的目的DNA序列完全一致,其插入大肠杆菌表达载体能获得表达,且表达产物具有抗原活性,能与商品化的乳头瘤病毒抗体及乳头瘤病毒感染患者的血清发生抗原抗体反应。结论从食管癌组织中能检出人乳头瘤病毒HPV16型晚期表达基因区L_2特定片段的基因,该片段确具高度保守性。在大肠杆菌中表达此片段所获得的表达产物,有抗原活性,有望用于流行病学检查,预警人乳头瘤病毒感染相关的癌症发生。

摘要：作者设计并合成了一对用于PCR技术的突变引物HIV-1 Pr1和HIV-1Pr2,分别在两引物中设计了两个突变点,使突变后基因含有EcoRI、HindⅢ和TAA序列,便于HIV-1 Pr基因的定向克隆和表达。用HIV-1 Pr1和HIV-1 Pr2作引物,采用PCR方法从HIV-1基因组DNA中扩增出了一个360bp长的DNA片段,用EcoRI和HindⅢ双酶切法将此片段定向克隆入pUC19质粒,将克隆基因插入M13mp18进行DNA序列分析。结果表明,该基因序列的读框完全正确,从而为HIV-1 Pr基因的表达及抑制剂的研究奠定了基础。

摘要：目的建立优化的ｍＲＮＡ差示ＰＣＲ条件；运用建立的条件及ＧＱＳ９６００分离胃癌ＧＣ７９０１与胃粘膜ＧＥＳ１细胞株之间的差异表达基因片段；根据获取的序列，设计引物并运用于胃癌组织、血、活检胃粘膜标本检测，拟从中筛选出检出率与符合率高的数对引物，建立胃癌基因诊断方法．方法以胃癌ＧＣ７９０１与胃粘膜ＧＥＳ１细胞株为研究对象，探索ｍＲＮＡ差示ＰＣＲ的最佳反应条件，运用优化的条件分离细胞株之间的差异表达基因片段；以回收的片段作探针，打点杂交证实为真正的差异片段后，对纯化产物进行直接序列分析及ＧｅｎＢａｎｋ同源性检索，同源性低的序列递交给ＧｅｎＢａｎｋ；设计引物，采用ＲＴＰＣＲ方法对胃癌组织、血、活检胃粘膜进行检测，筛选出检出率与符合率高的５对引物建立多重ＰＣＲ诊断胃癌方法．结果①优化的差示ＰＣＲ条件为：前５轮ＰＣＲ循环采用９４℃３５ｓ，４０℃２ｍｉｎ，７２℃３０ｓ，后３５轮ＰＣＲ循环采用９４℃４５ｓ，５５℃２ｍｉｎ，７２℃１ｍｉｎ，最后在７２℃延伸７ｍｉｎ；②确认并分离出差异条带１５４条，胃癌细胞株泳道中存在而胃粘膜细胞株泳道中缺失的有８２条，胃粘膜细胞株泳道中存在而胃癌细胞株泳道中缺失的有３５条，胃癌细胞株泳?

摘要：目的:确定抗胃癌抗体轻链可变区(VL)的一级结构,并模建其三级结构. 方法:从抗人胃癌噬菌体抗体库中筛选出VL基因,并进行序列测定和分析.利用同源蛋白结构模建技术,采用计算机辅助分子设计系统模建VL的三维空间结构. 结果:所获得的VL序列符合鼠抗体可变区特征,并成功构建了其三维空间结构. 结论:所测得的VL一级结构和构建的三维空间结构均有较高的可靠性.