摘要：根据已发表的乙型脑炎病毒核苷酸序列，设计合成了１９寡核苷酸，作为检测该病毒的基因探针。以大肠杆菌ＤＮＡ聚合酶ＩＫｌｅｎｏｗ片段标记合成的寡核苷酸后，经过分子杂交证明该探针能检测出１ｐｇ靶ＤＮＡ或ＪＥＶ感染Ｃ６／３６细胞６小时后的病毒。

摘要：对在胃癌高表达的EPH家族基因erk胞外的配体结合区基因扩增及克隆．方法：从胃癌患者手术切除标本中提取RNA，反转录为cDNA，以计算机辅助分析设计并合成引物进行RT－PCR，并将扩增片段克隆入pUC19质粒，用酶切及PCR方法筛选鉴定阳性克隆．结果：RT－PCR扩增片段与设计相符，且特异性好，无非特异产物出现，表明所设计引物符合要求．酶切及巢式PCR、PCR－RFLP方法证明克隆片段正确插入pUC19的HindIII和BamHI位点，并将重组克隆命名为pGE42．结论；克隆的完成为进一步研究该基因在胃癌的发生中的作用，寻找其胞外配体及进行表达产物的细胞定位等工作打下基础．

摘要：肿瘤坏死因子与γ干扰素具有非常相似的生物学活性,并在一些主要的生物活性方面表现有较强的协同作用。本文采用寡核苷酸指导下的定位缺失-插入体外基因突变技术,删除了干扰素与肿瘤坏死因子串联基因之间的非编码区,去徐了γ干扰素的翻译终止信号,插入了一个人工设计的连接肽,使γ干扰素与肿瘤坏死因子基因在不改变读码框架的条件下融合起来,并在大肠杆菌表达系统中表述了兼有γ干扰素和肿瘤坏死因子功能的融合蛋白。

摘要：CD4是T淋巴细胞分化抗原,是HIV的受体。作者设计并化学合成了一对PCR引物,以人CD4 cD-NA为模板,成功地扩增出人CD4 N端两个结构域的编码基因(600 bp),并在此基因两端分别插入了EcoRI和HindⅢ酶切位点及起始和终止码。通过EcoRI和HindⅢ双酶切位点将CD4基因克隆入pUC19质粒,经过PCR和酶切鉴定得到CD4重组克隆pT403。DNA序列分析结果表明,所克隆CD4基因与已发表的人CD4基因序列完全一致。

摘要：目的：重组表达angiostatin的功能结构域K1-3，并制备抗体，为其作用机理研究打下基础．方法：设计引物，通过PCR以人纤溶酶原CDNA为模板扩增出K1-3基因片段，克隆至pGEX-4T-l融合表达载体，IPTG诱导，挑出表达克隆，切下基因片段，克隆至pUC19进行序列测定，保留序列完全正确的克隆并进行诱导表达;从SDS-PAGEL切下表达的蛋白条带作为抗原免疫家兔，制备多克隆抗体，并以Westernblotting检测抗血清的结合特异性·结果：DNA电泳结果显示PCR扩增出约780hP的片段，序列测定表明为K1-3;K1-3可以与GST融合表达，产物存在于包含体中;抗血清与K1-3及煮沸变性的天然angiostatin特异地结合．结论：经PCR扩增并克隆到序列正确的K1-3片段，而且能够以融合形式表达，用其免疫家兔获得特异性抗体．

摘要：OK T8杂交瘤细胞株从American typecuhure collection(ATCC)获得,产生抗人CD8分子的单克隆抗体IgG2a(γ2a,κ),为了对这一鼠源性单抗进行基因工程改造,我们首先克隆了该单抗的κ轻链可变区基因,并测定了其碱基序列,现将结果报道如下: 通过计算机查找并分析了已发表的几十株抗体的轻链可变区基因序列,经比较其5’端保守序列和J区序列,设计了一对DNA引物:GTGAATTCATGGACATCCAGATGACCCA-

摘要：基因的定量分析对分子生物的研究有着重要的作用,而采用PCR方法进行基因定量已成为一种有效的方式.并且,目前已有多种利用PCR进行基因定量的方法,其中以竞争PCR定量和PE公司既时定量PCR方法测定结果较为准确,应用较多既时定量PCR方法采用了特殊设计的荧光-淬灭探针和精密的既时荧光检测设备进行定量.该方法简化的操作,提高的测定的灵敏性和准确性,但其试剂和仪器的价值目前相当昂贵,一般实验室难于承担[1].而竞争PCR方法虽然操作比较麻烦.但也能进行较准确的定量,适合一般实验室使用,为了进一步简化竞争PCR方法,我们对实验进行了改进,建立分级定量的哪方法,只用3种浓度的竞争模板与样品RNA的恒定cDNA混合进行3个PCR反应,通过测定待测模板与竞争模板的终产物荧光强度比值来确定待测RNA的初始量.该方法也适合多个样品同时测定.