摘要：目的构建PRL-3基因RNA干扰慢病毒载体并建立被稳定感染的HepG2单克隆细胞株。方法设计PRL-3基因特异性RNAi靶序列,合成靶序列的DNA oligo,退火形成双链DNA,与含绿色荧光蛋白(GFP)编码基因的pGCL-GFP线性化载体连接,产生重组慢病毒质粒LV-PRL3-siRNA,转化感受态细胞,PCR筛选阳性克隆,并测序鉴定。用Lipofectamine 2000将LV-PRL3-siRNA、pHelper 1.0和pHelper 2.0这3种质粒共转染293T细胞,包装产生慢病毒,经孔稀释法,测定病毒滴度。重组慢病毒感染肝癌HepG2细胞,进行RealTime-PCR和Western-Blot验证PRL-3基因的沉默效果,筛选出最佳干扰序列组及阴性对照组的单克隆细胞株。结果成功构建PRL-3基因RNA干扰慢病毒载体并获得相应的慢病毒,浓缩病毒悬液的滴度为6E+8 ***-1。重组慢病毒对HepG2细胞PRL-3基因表达有明显沉默作用,其中第一干扰序列效果最明显。筛选出最佳干扰序列组及阴性对照组的单克隆肝癌细胞株。结论成功构建人PRL-3基因特异性的慢病毒干扰载体,并筛选出最佳干扰序列组及阴性对照组的单克隆肝癌细胞株。