摘要：目的：制备稳定分泌抗人生长分化因子15（GDF15）单克隆抗体（m Ab）的杂交瘤细胞系,并对其分泌的m Ab进行鉴定。方法：根据人GDF15氨基酸序列特征,设计合成了8条能够免疫产生GDF15特异性抗体的抗原多肽,与VLP载体偶联后,免疫雌性BALB/c小鼠,利用杂交瘤技术制备鼠源抗人GDF15的m Ab,用间接ELISA检测m Ab腹水效价。结果：获得针对7个抗原多肽的12株稳定分泌抗人GDF15的杂交瘤细胞系,腹水m Ab效价可达1×104~1×109。结论：获得了针对不同抗原多肽的抗人GDF15的特异性m Ab,为进一步研发以GDF15为靶点的单克隆抗体抗肿瘤药物奠定了基础。

摘要：目的:构建人CaNAα(钙调神经磷酸酶催化亚基α异构体,calcineurin catalytic subunit alpha isoform)RNAi慢病毒载体PPP3CA-RNAi-LV并鉴定。方法:根据CaNAαmRNA选择靶区、设计合成shRNAs及无关对照序列,酶切连接pGCSIL-PUR载体,经测序鉴定阳性克隆,提取质粒、转染SBC-5细胞,经real-timePCR及Western blot检测CaNAα沉默水平;选择高沉默效率的pGCSIL-PUR-shRNA3进行慢病毒颗粒包装,浓缩纯化并滴定浓度后,-80℃保存备用。结果:与对照组相比,pGCSIL-PUR-shRNA3沉默效率最高,成功包装慢病毒颗粒,滴定浓度为1×109TU/ml。结论:成功构建人CaNAαRNAi慢病毒载体PPP3CA-RNAi-LV,为后续功能研究奠定基础。

摘要：目的：克隆BLCAP基因cDNA并构建和鉴定针对于BLCAP基因的siRNA真核表达载体.方法：从培养的人骨肉瘤细胞系SOSP-9607细胞中提取总RNA,经RT-PCR获得BLCAP基因.将该基因克隆到pGEM-T-Easy载体中,酶切及测序鉴定.将合成的siRNA核酸片段退火形成双链后连接到经BamHI和HindⅢ双酶切后的pSilencer4.1真核表达载体,命名为pSilencer4.1-B1以及pSilencer4.1-B2,并进行酶切及测序鉴定.脂质体法转染SOSP-9607细胞系,G418筛选以及RT-PCR验证构建的真核表达载体对目的基因的干涉情况.结果：经酶切及测序鉴定,所获得的目的片段序列BLCAP基因完全相符.重组质粒中含有与理论值相符的插入片段,其测序结果与设计序列一致.经脂质体法转染后pSilencer4.1-B2可明显抑制SOAP-9607细胞的BLCAP表达.结论：成功克隆了BLCAP基因并cDNA构建和验证了其siRNA真核表达载体.