摘要：目的探讨白色假丝酵母菌ERG11基因突变与唑类抗真菌药物耐药的关系。方法纸片扩散法初步筛选临床分离的耐唑类抗真菌药物的白色假丝酵母菌,测定初筛耐药株对氟康唑和伊曲康唑的最低抑菌浓度,随机选择10株白色假丝酵母耐药株,提取基因组DNA。利用DNASTAR软件辅助设计3对PCR引物,以提取的目的 DNA为模板,分别从前(P1)、中(P2)、后(P3)3段扩增ERG11基因全序列。扩增后的PCR产物经纯化后测序,将测序结果与GenBank中已知标准序列(X13296)进行比较分析。结果电泳结果显示,获得的3段PCR产物大小与预期结果一致。测序结果显示成功获得10株白色假丝酵母菌ERG11全基因序列。与GenBank中标准株序列(X13296)比较,耐药株均存在同义突变和错义突变,共27个碱基突变位点。15个位点是错义突变,其中F126LI、166N、H183Q、V437I、S453F和N490K为新发现的突变位点。结论耐唑类抗真菌药物的白色假丝酵母菌ERG11基因有多个发生错义突变的位点,且为多点突变,可能与其耐药有关。

摘要：目的建立快速检测脑脊液标本中常见病原菌的微型寡核苷酸芯片。方法根据脑脊液中常见病原菌16S rRNA基因序列设计通用引物和检测探针;探针固定于尼龙膜上制成寡核苷酸芯片;通用引物扩增病原菌DNA并标记生物素,产物与芯片进行反向杂交检测;对该体系的敏感性和特异性进行了测试,并检测了32例临床病原菌感染的脑脊液标本。结果所有实验菌株均只与芯片上相应探针杂交。该法最低可检测出10 CFU/ml的大肠埃希菌;32例临床本的检测结果与常规鉴定法完全一致。结论该寡核苷酸芯片法能够准确、敏感、快速地检测脑脊液标本中的病原菌。

摘要：①目的　设计并建立多重半套式聚合酶链反应 (PCR)快速检测临床标本中感染病原菌DNA方法。②方法　通过对多数病原菌 16srRNA基因保守区和变异区序列分析 ,设计通用引物和革兰阴性菌及革兰阳性菌的特异性引物分别作为外侧和内侧引物 ,分两步先后加入同一反应体系中对不同细菌的DNA进行扩增。③结果金黄色葡萄球菌和大肠埃希菌经扩增后均有长度为 10 32bp的DNA片段产生 ;金黄色葡萄球菌另有一长度为336bp的特异性产物 ,大肠埃希菌另有一长度为 12 7bp的特异性产物。 ④结论　该方法可以特异、敏感、快速检测出临床感染的病原菌。

摘要：目的初步建立一种脑脊液标本中常见病原菌的快速检测方法。方法根据脑脊液标本中常见病原菌16S rRNA基因保守区的序列设计用于基因扩增的通用引物,制备细菌的通用探针、革兰阳性和阴性菌通用探针,以及肠杆菌科属、嗜血杆菌属和脑膜炎奈瑟菌、金黄色葡萄球菌、凝固酶阴性葡萄球菌、肺炎链球菌、产单核李斯特菌的属或种特异性探针,将探针加尾后固定于尼龙膜上制成寡核苷酸芯片。提取标本中病原菌DNA后用通用引物行PCR扩增,扩增过程中用生物素标记;将产物变性后分别与点有各种探针的尼龙膜反向杂交,检测脑脊液中细菌的感染情况。结果所有探针均只与其相应的细菌DNA扩增产物反应产生杂交信号。结论建立的脑脊夜病原菌寡核苷酸芯片能够准确、敏感、快速、高效地检测脑脊液标本中病原菌的感染情况。