摘要：通过GenBank中对小反刍兽疫病毒N蛋白基因、亨德拉病毒及尼帕病毒H蛋白基因、西尼罗河热病毒PrM蛋白基因和非洲猪瘟病毒P72基因这5种外来病病毒的主要基因的分析比较,选择相应基因的保守序列进行人工合成,并对每段基因设计2对引物,扩增片段大小均在350-550bp之间。通过对条件的反复优化,建立了1种能够同时检测到这5种病原的并联PCR/RT-PCR方法。结果显示,该方法最低可检测到10-5 mg/L的病毒的DNA/cDNA,而且特异性强、重复性好。在45份猪样品及56份蝙蝠样品的检测中,只有阳性对照出现了目的条带,而其他均未出现目的条带。这说明本研究建立的5种主要外来病病毒并联PCR/RT-PCR的检测方法具有灵敏度高、特异性好的特点,可用于ASFV、PPRV、HeV、NiV和WNV的预防、检测及扑灭。

摘要：根据GenBank中发表的相关病毒的基因序列,通过分析比较小反刍兽疫病毒(PPRV)、非洲猪瘟病毒(ASFV)、西尼罗河热病毒(WNV)、亨德拉病毒(HeV)和尼帕病毒(NiV)的保守区域(PPRV的N基因、ASFV的P72基因、HeV和NiV的H基因,以及WNV的PrM基因),各设计筛选出一套特异性引物和Taqman探针,建立了5种外来动物疫病并联荧光定量RT-PCR检测方法。利用该方法,对103份样本进行了临床检测,结果除阳性对照外,其他均为阴性。检测结果验证了本研究建立的Taqman模式并联荧光定量PCR检测方法具有鉴别诊断的特点,可以作为临床检测这5种病原体的参考方法。