摘要：目的利用CRISPR/Cas9系统构建精子特异性磷脂酶C zeta-1(phospholipase C zeta1,Plcz1)基因敲除(Plcz1)小鼠模型,探讨Plcz1基因在雄性小鼠生育过程中的作用。方法选择小鼠Plcz1基因第6、7外显子作为靶位点,前后两个位点设计2对sgRNA序列,再将2对sgRNA以Golden Gate方法插入pX330A质粒中,构建pX330-sgRNA重组质粒。经扩增、纯化后,将重组质粒显微注射进小鼠受精卵原核中,进行胚胎移植至代孕母鼠,F0代小鼠出生后,提取其尾DNA进行PCR鉴定和DNA测序分析。通过F0代与野生型小鼠交配得到F1代小鼠,F1代交配繁殖至F2代获得Plcz1基因缺失的小鼠纯合品系,Plcz1与野生型小鼠交配,分析Plcz1雄鼠的生育能力。结果成功构建pX330-sgRNA重组质粒,通过繁育和测序筛选获得3只Plcz1雄鼠(Plcz1、Plcz1、Plcz1),对3只小鼠进行目的基因测序发现:(1)Plcz1:Plcz1基因第6、7外显子区域缺失3078 bp;(2)Plcz1:第7外显子区域缺失7 bp,该小鼠在饲养过程中死亡;(3)Plcz1:Plcz1基因第6外显子区域缺失1 bp。结论利用CRISPR/Cas9,成功获得Plcz1雄性小鼠,Plcz1雄性小鼠可育,但与野生型小鼠相比,其生育能力明显下降。