摘要：目的:制备介孔二氧化硅纳米载体(MSN)并包载肽酰基精氨酸脱亚胺酶4(PADI4)小干扰RNA(PADI4-siRNA-MSN),阐明PADI4-siRNA-MSN对类风湿关节炎成纤维滑膜细胞(RA-FLS)凋亡的影响。方法:采用模板法合成MSN,包被阳离子聚合物聚乙烯亚胺(PEI)及荧光标记分子罗丹明B(Rh B),检测其表征,包括粒径、Zeta电势、荧光和形貌。设计并合成2对FAM标记的针对PADI4基因编码区的干扰核苷酸链(si-944、si-1225)及阴性对照si-NC,制备PADI4-siRNA-MSN和siNC-MSN,转染RA-FLS,流式细胞术(FCM)鉴定转染率。采用荧光定量PCR、蛋白印迹技术检测转染48 h后,干扰组和阴性对照组细胞PADI4表达量,FCM检测细胞凋亡率,激光共聚焦扫描显微镜(CLSM)观察PADI4-siRNA-MSN胞内分布。所有数据采用配对t检验进行分析。结果:MSN经表征检测显示已成功制备并包被Rh B、PEI,FCM结果显示转染率为93. 3%(si-944)和91. 9%(si-1225)。si-NC组中的PADI4 mRNA水平为1. 23±0. 27; si-944、si-1225干扰组中分别为0. 35±0. 12、0. 44±0. 12,均显著低于阴性对照组(P<0. 05)。蛋白印迹结果与PCR结果一致。与si-NC组细胞凋亡率(8. 83±0. 15)相比,si-944和si-1225组细胞凋亡率(11. 72±0. 82,13. 00±1. 42)显著增加(P<0. 05)。CLSM结果显示PADI4-siRNA-MSN分布于核周。结论:PADI4-siRNA-MSN成功制备,并转染RA-FLS,有效沉默PADI4基因,显著增加RA-FLS的凋亡率。PADI4-siRNA-MSN在抑制RA-FLS增殖、促进凋亡中具有一定的应用前景。

摘要：目的:设计针对PADI-4基因的RNAi表达载体,抑制PADI-4基因在HL-60细胞中的表达,初步确定PADI-4基因在类风湿性关节炎发生发展中的作用,为后续研究奠定实验基础。方法:设计并合成4对针对PADI-4基因编码区的核苷酸链,核苷酸链经体外退火后形成双链SiRNA,克隆进入pSiRNA-hH1neo G2空载体后转化入GT116细胞,通过蓝白斑筛选后,挑取白斑进行扩增,抽提质粒并对重组质粒进行双酶切分析。以脂质体转染法,分别将pSiRNA-hH1neo G2空载体和4个重组质粒载体转染进入HL-60细胞系,于转染的第3、5、7、10、14天后收集细胞,抽提细胞总RNA后,反转录成cDNA,用Real-time PCR技术检测各实验组HL-60细胞内PADI-4基因mRNA水平的表达情况,并做统计分析。结果:经Acc65Ⅰ和HindⅢ双酶切鉴定,重组质粒中已经插入目的片段,为合格质粒;转染pSiRNA表达载体后,HL-60细胞系中PADI-4基因mRNA表达水平下降,其中以第3号载体的干扰效果最优,干扰效率达到62%。结论:成功构建针对PADI-4基因的pSiRNA表达载体,并且筛选出干扰效率最好的载体,为后续研究PADI-4基因在类风湿性关节炎中的作用奠定实验基础。

摘要：目的研究La蛋白与乙型肝炎病毒(HBV)mRNA稳定性和蛋白质表达之间的相关性。方法设计并合成La蛋白mRNA特异性小干扰RNA(siRNA),转染HepG2．2．15细胞,继续培养3d后分别裂解转染和未转染siRNA的细胞；抽提蛋白质,Western blot检测La蛋白含量变化；于转染后的第1、2、3、5、7、9天分别收集细胞培养上清液,实时荧光定量聚合酶链反应技术检测上清液中HBV DNA的变化情况,电化学发光分析技术检测乙型肝炎表面抗原,乙型肝炎e抗原含量变化情况。结果La蛋白在转染siRNA的HepG2．2．15细胞中表达明显低于未转染siRNA的细胞；转染siRNA的细胞分泌到上清液中乙型肝炎表面抗原、乙型肝炎e抗原和HBV DNA的含量也明显低于未转染siRNA的细胞。结论在HepG2．2．15细胞内,La蛋白与HBV mRNA稳定性和蛋白质表达具有功能相关性。

摘要：目的 研究小干扰RNA（siRNA）沉默肽酰基精氨酸脱亚胺酶4（PADI4）基因在滑膜成纤维细胞（FLS）凋亡调控中的作用,为进一步研究PADI4在RA发病机制中的作用奠定基础.方法 设计并合成2对针对PADI4基因编码区的干扰核苷酸链,通过脂质体介导将siRNA转入RA-FLS细胞中,作用48 h后收集FLS细胞,抽提RNA逆转为cDNA,并提取FLS细胞蛋白质,通过荧光定量PCR、蛋白印迹技术,确定siRNA成功干扰PADI4表达后,比较siRNA实验组FLS细胞和对照组FLS细胞凋亡率,细胞周期调控蛋白CyclinB1和P21的表达量.收集细胞培养液,ELISA法测定IL-1β.所有数据采用配对t检验进行分析.结果 所设计的针对PADI4的siRNA成功干扰PADI4在FLS中的表达,空白对照组（si-NC）中PADI4 mRNA水平为1.00±0.20,si-944和si-1225干扰组分别为0.38±0.20（t=9.607,P＜0.01）和0.39±0.23 （t=8.394,P＜0.01）;FLS中与对照组细胞凋亡率（1.6±0.3）％相比,si-944和si-1225干扰组分别为（5.4±0.6）％（t=-19.223,P＜0.01）,（6.1±0.6）％（t=-24.229,P＜0.01）,细胞凋亡明显增加.siRNA转染组细胞周期蛋白CyclinB1表达下降,P21表达上升.与对照组IL-1β水平（23.9±0.7） ng/ml相比较,si-944和si-1225干扰组IL-1β分泌增多[分别为（26.8±0.7） ng/ml,（27.7±0.7） ng/ml;t=-10.747,-10.967,P均＜0.01）.结论 PADI4在FLS细胞凋亡中起着重要的调控作用,可能在RA的发病中起着一定的作用.

摘要：检验医学科住院医师规范化培训(简称住培)是培养合格检验医师的必经途径,与临床其他专业相比,检验医学科专业培训的内容和目标有其自身的特点和要求。该文总结分析了同济大学附属东方医院检验科开展检验住培工作的探索与实践,围绕当前检验医学科专业住培目的,对轮转住院医师进行培训,探讨了在医学检验教育改革新形势下培养真正既懂临床又懂检验的检验医师亟需解决的问题,对进一步提升住院医师培训内涵质量具有重要的参考和借鉴意义。

摘要：目的:建立环介导等温扩增技术(loop-mediated isothermal amplification,LAMP)检测呼吸道感染患者痰液中肺炎克雷伯菌(Klebsiella pneumoniae,Kpn)的方法并进行初步应用。方法:基于Kpn phoE基因设计4条特异性引物,对反应条件中的Mg^2+和甜菜碱浓度进行优化,建立检测Kpn LAMP方法并进行特异性和灵敏度试验;收集308例呼吸道感染患者痰液样本,进行细菌培养法、LAMP法、DNA测序技术检测,评估LAMP检测体系。结果:8 mmol/L、0.4 mmol/L确定为Mg^2+和甜菜碱的最佳扩增浓度;该体系特异性强,与其他菌株无交叉反应,灵敏度为104 CFU/mL;临床样本中Kpn的LAMP检出率(53.89%)高于培养法(42.20%),差异有统计学意义(χ^2=161.65,P<0.05);LAMP法与细菌培养法在Kpn阳性样本、无细菌生长样本、非Kpn其他细菌阳性样本中的一致率分别为96.15%、100%、65.25%,46例不一致样本经DNA测序验证,LAMP法与测序符合率为86.95%(40/46);LAMP法和DNA测序法对131例样本同时进行检测,经Kappa检验两者具有极好的一致性(Kappa系数=0.817)。结论:与细菌培养法相比,LAMP法具有准确性高、灵敏度高、特异性强、反应省时等优势,可以作为肺炎克雷伯菌的快速检测方法。