摘要：背景:目前构建衰老动物模型的方法主要有注射D-半乳糖,臭氧损伤,去胸腺,采用老龄动物等。因D-半乳糖造模简单、试验周期相对较短,故目前广泛应用于衰老试验研究。目的:使用D-半乳糖建立亚急性衰老小鼠模型,并对其进行行为学、生化以及免疫等方面的评价。设计、时间及地点:随机对照动物实验,于2008-03/08在南通大学医学院完成。材料:ICR小鼠35只,体质量(18±2)g,雌雄兼用。随机分为正常对照组15只,衰老模型组20只。方法:衰老模型组小鼠用D-半乳糖按120mg/kg背部皮下注射6周,1次/d,造成亚急性衰老模型;正常对照组不予药物。主要观察指标:使用Y型电迷宫检测小鼠的学习、记忆功能;使用相关试剂盒测定血清中丙二醛浓度、超氧化物歧化酶活力和脑中脂褐质含量、单胺氧化酶-B活性以及肝中谷胱甘肽过氧化物酶活性等生化指标;单向琼脂扩散法测定血清中IgG含量;四甲基偶氮唑盐法测定小鼠脾淋巴细胞转化刺激指数;ELISA检测血清中细胞因子白细胞介素2,γ干扰素的浓度。结果:与正常对照组相比,Y迷宫显示衰老模型组小鼠记忆功能明显下降,表现为不同时间的正确反应率降低,潜伏期延长;生化指标显示模型小鼠血清中丙二醛及脑中脂褐质含量增加、血清中超氧化物歧化酶与肝中谷胱甘肽过氧化物酶活力下降,而脑中单胺氧化酶B活力没有明显改变;免疫相关指标显示模型小鼠血清IgG水平下降、脾淋巴细胞转化刺激指数降低、血清中细胞因子γ干扰素的浓度减少,白细胞介素2变化不明显。结论:D-半乳糖建立亚急性衰老模型小鼠记忆功能下降、氧自由基产物增加和抗氧化能力下降、免疫功能降低,可用于行为学、抗氧化、以及免疫等方面的抗衰老药效研究。

摘要：为建立一种同时检测牛轮状病毒(BRV)和牛冠状病毒(BCV)的方法,本研究根据GenBank中登录的BRV VP6基因保守序列和BCV N基因保守序列设计引物和探针,通过方阵法优化体系后,建立了一种可以同时检测BRV和BCV的双重TaqMan荧光定量PCR方法。该方法与牛病毒性腹泻病毒、牛细小病毒、牛肠道病毒、牛传染性鼻气管炎病毒均无交叉反应,特异性强;敏感性试验结果显示,该方法对BRV和BCV重组质粒标准品的最低检测限分别为41.8拷贝/μL和3.55拷贝/μL,敏感性高;组内和组间变异系数均小于2%,表明该方法重复性较好。利用建立的该方法对本实验室于2019年3月~9月在河北省内采集的72份牛腹泻粪便样品进行检测,结果显示BRV的阳性率为50.0%(36/72),BCV的阳性率为75.0%(54/72),BRV和BCV共感染率为33.3%(24/72);而常规PCR的上述检测结果分别为47.2%(34/72)、70.8%(51/72),共感染率为29.1%(22/72),二者对BRV和BCV检测结果的阳性符合率分别为97.2%、96.8%,表明该方法可以用于临床样品的检测。本研究建立的双重TaqMan荧光定量PCR方法对BRV和BCV的检测和流行病学调查具有重要意义。