摘要：目的探讨利用RNAi技术抑制cyclin E的表达,研究cyclin E在食道癌细胞Eca-109生长、增殖过程中的作用。方法设计针对cyclin E基因的siRNA序列,合成并克隆入pGFU6/neo质粒中,用脂质体转染法将重组质粒转染Eca-109细胞。采用RT-PCR和免疫印迹试验检测稳定转染的Eca-109细胞中cyclin E的表达水平。台盼蓝排斥法、MTT法、3H-TdR掺入试验、平板克隆形成试验检测干扰cyclin E后对细胞活力以及增殖能力的影响,流式细胞仪测定细胞周期时相分布。Western印迹检测细胞增殖有关蛋白PCNA、p21、bax和bcl-2表达变化。结果台盼蓝排斥法、MTT法、3H-TdR掺入试验和平板克隆形成试验显示转染组细胞活力及增殖受到抑制;阻滞在G0/G1期细胞比例增加。Western印迹表明PCNA和bcl-2蛋白表达量下降;而p21蛋白和Bax蛋白表达量上升。结论沉默cyclin E基因能明显抑制食道癌细胞Eca-109的活力及增殖能力,并且细胞周期被阻滞,机制可能与下调肿瘤细胞内PCNA以及上调p21的表达有关。

摘要：为实现空间环境下蛋白质检测,设计开发了一套小型化、集成化、高灵敏度的微流控芯片蛋白质检测装置,包括小型化光学检测单元、自动进样单元、自动控制单元等。该装置基于Elisa和Western blotting相结合的蛋白检测技术完成小型化光信号检测装置的研制。装置完成后对EGFR、FGFR4、HER2、IL6等四种蛋白质进行验证检测,结果显示各个样品回归分析R2值均能够达到0.98以上;对多个蛋白进行联合检测证实本装置专一性很好,不会引起非特异性反应,证实了检测装置的有效性。