摘要：目的建立人呼吸道合胞病毒(hRSV)荧光PCR(FQ-PCR)检测方法,并确定其最低检出限。方法针对hRSVN基因相对高度保守的序列,采用引物和探针设计软件PrimerExpressv2.0,设计1对特异性引物和1条TaqMan荧光探针,组装成荧光PCR检测试剂。以此试剂检测345份咽拭子样品,与ELISA法检测hRSVIgM抗体比较,确定最低检出限。结果该方法的最低检出限是传统的病毒滴度测定的104.79倍。与IgM抗体检测法相比,对于感染早期患者具有更高的检出率。结论建立的hRSVFQ-PCR检测方法具有简便、快捷的特点,适用于hRSV感染的早期诊断。

摘要：在PCR过程中 ,模板GC含量过高是一个不利因素。如果设计扩增片段较长 ,则进一步增加了PCR扩增的难度。解决这一问题对于以PCR成功获取富含GC的长基因有非常重要的意义。以人巨细胞病毒pp65全基因 (约 1 95 0bp ,GC %为 67%)为例 ,在PCR系统中测试不同添加剂(甘油、乙醇、DMSO、甜菜碱等 )及各种组合 ,摸索扩增目的基因的最佳条件。结果发现 :无或单一的添加剂都不能获得目的基因片段 ,只有当同时使用DMSO和甜菜碱 ,并在适当浓度时才能够获得特异产物。在PCR系统中包含复合增强剂能有助于高GC %、长基因片段的扩增 。

摘要：目的探索快速诊断儿童化脓性脑膜炎的新技术。方法通过设计细菌16SrRNA基因高度保守区的引物和探针,对疑似化脑的21份脑脊液(CSF)进行荧光定量PCR及基因芯片杂交检测,同时与脑脊液细菌培养结果比较。结果(1)荧光定量PCR发现21份脑脊液标本有8份阳性,阳性率为38.095%(8/21),明显高于脑脊液培养的阳性率19.047%(4/21),差异具有显著意义(P<0.01)。(2)基因芯片杂交结果8份阳性,其中大肠埃希菌探针阳性5份,肠道杆菌科探针阳性2份,金黄色葡萄球菌探针阳性1份;脑脊液培养4份阳性,分别为肺炎克雷伯菌培养阳性1份,阴沟肠杆菌阳性1份,大肠埃希菌阳性2份;基因芯片杂交阳性率为38.095%(8/21),芯片杂交阳性结果与荧光定量PCR大体一致。结论荧光定量PCR结合基因芯片杂交技术检测儿童化脑具有快速、敏感、特异的特点,对儿童化脓性脑膜炎的早期诊断有一定的应用价值。

摘要：本研究通过对乙型脑炎活疫苗减毒过程中间株SA14 12 1 7株进行全序列测定和分析 ,进一步了解乙脑活疫苗减毒及其稳定性的分子机制。根据已发表的SA14 14 2株及SA14 株的序列 ,设计 6对重叠引物 ,涵括整个乙脑病毒的基因组 ,通过RT PCR扩增出SA14 12 1 7株的各cDNA片段 ,分别克隆到pGEM T载体 ,转化至TG1受体菌中 ,挑取阳性克隆进行鉴定后测序。结果表明SA14 12 1 7株基因组全序列长 10 976个核苷酸 ,从 96到 10 394为一个长开放读码框 ,编码 3432个氨基酸。与野毒株SA14 和疫苗株SA14 14 2的核苷酸序列和氨基酸序列相比 ,同源性均在 99%以上 ,突变位点分散于各个区域 ,E区有 5个位点与疫苗株一致而与野毒株不同 ,3个位点与野毒株一致而与疫苗株不同 ,推测与其容易产生回复突变、恢复毒力有关。此外 ,NS3、NS5和 3′NTR的几个位点可能与病毒毒力稳定性相关。综上所述 ,乙脑病毒减毒中间株的基因组全序列基本类似于已发表的序列 ,若干突变位点影响病毒的弱毒性及毒力的稳定性。

摘要：目的考核和评价我国自行分离毒株研制的冻干水痘减毒活疫苗的安全性和免疫原性。方法采用随机、双盲、对照的原则进行设计,在2～6岁健康人群中进行开放式临床观察。结果试验疫苗共接种易感儿童738人,接种后的总体中强发热反应率为5.96%(44738),皮疹水痘样皮疹发生率为0.68%(5738);易感者接种39810PFU、2000PFU以及500PFU病毒量的疫苗后,抗体GMT分别为36.4、34.3和18.6;抗体阳转率分别为100%、98.77%和85.42%。结论我国自行研制的水痘疫苗具有较好的安全性和免疫原性。