摘要：目的克隆和表达丙型肝炎病毒(HCV)1b型地方株DY株ns5a基因。方法运用原核细胞基因工程技术。设计目的基因的特异引物,采用巢式PCR法,从含HCV 1b DY株全长cDNA的质粒HCV17中扩增出约480 bp的目的片段,将其插入克隆载体pMD18-Tvector中,再亚克隆到原核表达载体pET-28a中;经酶切、PCR及测序鉴定后转化入BL21菌株,在IPTG诱导下进行融合蛋白的表达;采用SDS-PAGE电泳及Western-blot检测NS5A蛋白的表达水平。结果成功构建了含有HCV1b DY株ns5a基因的重组体,并得以表达。结论成功构建和表达了HCV1b DY株ns5a基因,为进一步研究HCVns5a的基因型及探讨该基因编码的NS5A蛋白的性质和生物学活性创造了条件。

摘要：目的:克隆和表达丙型肝炎病毒(HCV)1b型地方株DY株ns5a基因,为进一步研究和应用该基因及其表达产物奠定基础。方法:采用基因重组技术完成实验。设计特异的引物,采用巢式PCR法,从含HCV 1b DY株全长cDNA的质粒HCV17中扩增出目的片段,约480bp;将其插入克隆载体pMD18-Tvector中,再与原核表达载体pET-28a重组;经酶切、PCR及测序鉴定后转化入BL21菌株,在IPTG诱导下进行融合蛋白的表达。采用SDS-PAGE电泳及Western-blot检测NS5A蛋白表达水平。结果:含有HCV 1b DY株ns5a基因的重组体构建成功,并得以表达蛋白,并且NS5A蛋白具有与HCV患者阳性血清中的多克隆的结合活性,具有很好的免疫原性。结论:运用原核细胞基因工程技术成功构建和表达了HCV 1b DY株ns5a基因,为进一步研究HCVns5a的基因型及探讨该基因编码的NS5A蛋白的性质和生物学活性创造条件。

摘要：本文在已克隆抗人ＣＤ３抗体ＶＨ和Ｖｋ基因的基础上，设计并合成了ＰＣＲ引物。两个外侧引物分别含有ＥｃｏＲＩ和ＳａｌＩ酶切位点及起始码和终止码序列，４个内侧引物各含部分连接肽基因序列。用加端ＰＣＲ分别在ＶＨ基因３＇端和Ｖｋ基因５＇端延伸部分连接肽基因序列，回收后混合运火；应用重叠延伸拼接法，将ＶＨ和Ｖｋ基因通过Ｌｉｎｋｅｒ序列串联为单链抗体基因；利用ＰＣＲ产物两端预先设计的ＳａｌＩ和ＥｃｏＲＩ酶切位点，将其克隆到ｐＵＣ１９质粒中，筛选到阳性克隆。经双脱氧终止法序列测定：ＶＨ和ＶＫ基因及Ｌｉｎｋｅｒ序列均正确，为用基因工程技术生产单链抗体奠定了基础。

摘要：根据Gen Bank DNA数据库序列信息设计引物,通过PCR扩增了Micro-Tom番茄(Lycopersicon esculentum)中编码番茄红素β-环化酶的Lcy B1、Lcy B2和Cyc B等3个基因序列,并对其进行了BLAST及多重排比分析.结果表明:Lcy B1和Lcy B2基因编码的叶绿体特异定位番茄红素β-环化酶分别位于第4和第10染色体,Cyc B基因编码的有色体特异定位番茄红素β-环化酶位于第6染色体.Lcy B2与Lcy B1基因核苷酸序列的同源性达84.4%,Cyc B与Lcy B1、Lcy B2核苷酸序列的同源性分别为59.3%和58.5%;Lcy B2与Lcy B1蛋白氨基酸序列的同源性达87.2%,Cyc B与Lcy B1、Lcy B2氨基酸序列的同源性分别为51.6%和51.8%.Lcy B1与Lcy B2在系统进化上亲缘关系更近.Lcy B1和Lcy B2蛋白均有一个由其N端81个氨基酸残基组成的叶绿体定位转运肽,Cyc B蛋白有一个由其N端83个氨基酸残基组成的有色体定位转运肽.

摘要：为建立油莎豆(Cyperus esculentus)的快繁体系,以茎尖为外植体,MS为基本培养基,采用正交设计法研究了6-BA、KT和NAA组合对丛生芽增殖和生根的影响。结果表明,3种生长调节剂对油莎豆丛生芽增殖的影响为6-BA> NAA> KT,最佳生长调节剂组合为1.0 mg L-16-BA+0.2 mg L-1KT,培养4周的增殖系数为7.58。MS培养基为最优生根培养基,生根率可达88.10%,平均生根数为2.04条。这为高效繁育油莎豆优质种苗和种质资源优化奠定基础。