摘要：根据NCBI上已知序列设计引物,利用RT-PCR技术从猪囊尾蚴中成功克隆了低分子量抗原基因Ag1V1,同源性和种系发育分析结果显示,河南分离株Ag1V1基因的核苷酸序列和预测氨基酸序列与日本分离株同源性为100%和98.9%,说明Ag1V1蛋白基因具有一定的保守性;通过生物信息学软件对其蛋白二级结构、疏水性及抗原表位等方面的预测,认为其有望成为诊断或免疫用抗原。

摘要：设计3个不同剂量的鸭源隐孢子虫试验感染2日龄雏鸡,通过临床症状、增重、排卵囊规律和法氏囊指数及寄生器官组织扫描电镜观察,证实贝氏隐孢子虫160万个卵囊感染即可引起明显的呼吸道症状,发病鸡增重显著降低,法氏囊严重萎缩。贝氏隐孢子虫致病程度和排卵囊规律与感染剂量相关,主要病变表现呼吸道病变和法氏囊炎症。

摘要：传统mRNA差异显示技术针对真核细胞mRNA3′端poly(A)尾设计12种两个锚定碱基的Oligo(dT)引物(第1位碱基不为A),将不同的mRNA反转录成cDNA;同时在5′端设计20种10bp随机引物,这样构成的引物对可扩增出大体涵盖一定发育阶段某种细胞类型中所表达的全部mRNA,经变性聚丙烯酰胺凝胶电泳,对比挑选差异表达片段。该技术具有简便、快速、RNA用量少、可同时比较多个样品、灵敏度高等优点,其主要不足是假阳性率较高。经不断优化反应条件,显著降低了假阳性的出现。目前该方法广泛应用于医学、动植物分子生物学等研究领域,用以检测差异表达基因和分离新基因、新特异性序列标签,研究动植物发育,检测遗传变异等。

摘要：目的为快速检测微小隐孢子虫,建立并优化了以SYBR Green I显色的环介导等温扩增快速检测隐孢子虫的方法。方法根据微小隐孢子虫18SrRNA基因的4条特异LAMP引物,设计2条环引物,建立了微小隐孢子虫LAMP检测方法。结果该方法省去95℃热变性和80℃酶失活过程,其最佳反应温度和时间是63℃和60min,Betaine、MgSO4、dNTP Mixture、Bst DNA聚合酶大片段的最佳浓度分别是0.8mol/L、8mmol/L、0.8mmol/L、8U/25μL,内外引物浓度分别为1.2μmol/L、0.2μmol/L,添加环引物后体系反应时间缩短为20min。对贾第虫、肠阿米巴、柔嫩艾美耳球虫、类圆线虫检测为阴性。该方法简便、快速,无需特殊设备。结论和常规PCR方法比较,LAMP检测隐孢子虫的灵敏度提高了100倍。该方法的建立为野外和临床隐孢子虫的快速检测提供技术手段。

摘要：利用绵羊无浆体(Anaplasma ovis)高度保守的Groel基因,建立了快速、特异、敏感的绵羊无浆体检测方法。根据GenBank上登录的绵羊无浆体Groel基因序列(FJ460438),设计1对特异性引物,建立了绵羊无浆体PCR检测方法,并对其进行特异性、敏感性、重复性试验及临床样品检测。结果显示,该方法能特异性地检测绵羊无浆体,与山羊无浆体、嗜吞噬细胞无浆体、牛无浆体、边缘无浆体、吕氏泰勒虫、绵羊泰勒虫、羊附红细胞体、弓形虫基因组均无交叉反应;该方法检测下限可达到7.7×10-15 g·μL-1,比文献报道的PCR敏感10倍(77×10-15 g·μL-1);具有良好的重复性;对81份羊临床血液样品检测结果表明,绵羊无浆体感染率为32.1%(26/81),高于文献报道的PCR(MSP4基因)检测结果(18.5%,15/81)。

摘要：为探讨地克珠利防控湖羊自然感染球虫的用药技术和效果,90只经粪检确诊为自然感染球虫的50日龄湖羊随机分为8组,其中第1~7组为药物试验组,分别按设计用药程序给予地克珠利,第8组为不用药对照组;应用饱和盐水漂浮法检查用药前后供试羊粪样中球虫卵囊,麦克马斯特法计数每克粪便中的卵囊数,收集阳性样品中球虫卵囊进行培养和鉴定,依用药后不同时期的球虫卵囊减少率、转阴率、平均增重率等判定药物防控球虫效果和增重效益。结果显示:按1 mg·kg-1剂量给予地克珠利,每天1次,连用2 d且间隔14 d再次用药对50日龄湖羊自然感染球虫的防控效果最好;用药后第56天,共4次给予地克珠利的试验羊比对照组羊平均每只多增重2.51 kg,经济效益显著;球虫种类鉴定表明,地克珠利抗小型艾美尔球虫(Eimeria parva)、类绵羊艾美尔球虫(***)、阿撒他艾美尔球虫(***)、槌形艾美尔球虫(***)、颗粒艾美尔球虫(***)、斑点艾美尔球虫(***)、苍白艾美尔球虫(***)、温布里吉艾美尔球虫(***)的效果良好。本研究结果为羔羊和育肥肉羊球虫病防控提供了技术方法。

摘要：建立了人源隐孢子虫动物感染模型,确定人源隐孢子虫在模型动物体内的寄生部位及组织病理学变化,以小鼠为接种对象,设计不同接种剂量,于接种后不同时间段剖杀小鼠.结果表明,免疫抑制组和非免疫抑制组均能感染隐孢子虫,使用免疫抑制剂组均能有效建立起隐孢子虫动物感染模型;人源隐孢子虫寄生在小鼠的十二指肠、空肠和回肠,在感染早期主要寄生在空肠和回肠,在感染中后期主要寄生在十二指肠和空肠,在虫体寄生部位有典型的组织学变化.

摘要：为建立荧光定量PCR方法检测嗜吞噬细胞无浆体（Anaplasma phangocytophilum），针对GenBank *** 16S rRNA基因保守序列（JN558815），设计1对引物1—25F／183—205R。以已知引物EE1／EE2和该引物进行巢式PCR扩增出预期大小片段（205bp），构建合有16srRNA基因的重组质粒，以质粒为模板构建了标准曲线。以1—25F／183—205R为荧光定量PCR引物，建立*** philum荧光定量PCR检测方法，并进行特异性、敏感性、重复性试验和临床样本检测。结果表明，该方法在6．4×10^3～6．4×10^8copies／μL相关系数为0．99，显示出良好的线性关系；所建方法能特异地检出***，对绵羊无浆体、牛无浆体和环形泰勒虫基因组DNA和灭菌双蒸水均无交叉反应；可检测到6．4×10^2copies／μL的标准质粒DNA，比常规PCR敏感性高100倍；批内及批间变异系数均低于2．0％，具有较高的重复性和稳定性；利用该方法对30份羊血液临床样品检出率比巢式PCR高16．67％。该研究为***临床检测和定量分析病原感染程度奠定理论基础。

摘要：为研制长久持效的硬蜱驱避剂,依据驱蚊酯的理化特性,以驱蚊酯为有效成分、无水乙醇为溶剂、α-吡咯烷酮为稳定剂、聚乙二醇-400(PEG-400)为增黏剂,分别以聚乙烯吡咯烷酮(PVP-K30)、羧甲基纤维素钠(CMC-Na)、麦芽糊精为缓释成分进行多种溶剂系统组合,设计4个驱蚊酯含量为20%的驱避剂原药配方,并进行系列稳定性试验,对配方进行筛选,并对筛选出的配方进行相关含量测定。结果表明,采用5%~20%的聚乙烯吡咯烷酮、5%~20%的α-吡咯烷酮、5%~20%的聚乙二醇-400、30%的无水乙醇为组成成分的原药配方具有最好的稳定性。利用气相色谱法测定制剂中驱蚊酯的含量,所制备的驱蚊酯长效驱避剂的平均日内精密度为0.59%,平均日间精密度为0.49%,平均回收率为97.4%,3个批次的驱蚊酯长效驱避剂含量均介于标示量的98.1%~103.8%。综上,制备的驱蚊酯长效驱避剂工艺简单,稳定性好,可重复性高。

摘要：根据GenBank中的参考序列设计并合成引物序列，从pMDM13h中扩增带酶切住点和His—tag的基因序列；用HindⅢ和XhoⅠ双酶切PCR扩增产物和pcDNA3．0载体，连接构建真核表达重组质粒pc3M13h，利用PCR，双酶切和测序鉴定其正确性；重组质粒pc3M13h转染COS-7细胞，瞬时表达的转染细胞（96孔板）在转染36．48h后，应用双抗体夹心酶联免疫吸附试验和免疫细胞化学，分别检测pc3M13h在COS-7细胞培养上清液和细胞内的表达．结果表明，设计合成的引物成功扩增了带有酶切位点和His—tag的基因序列；成功构建了真核表达重组质粒pc3M13，双抗体夹心酶联免疫吸附试验和免疫细胞化学检测显示，pc3M13h重组质粒不但能够在COS-7细胞中进行表达，而且能够进行微量的分泌表达．