摘要：目的　建立一种能快速区分 6种疱疹类病毒DNA特异的限制性内切酶图谱。方法　 2 0 0 2年 1～ 12月浙江大学儿童医院在疱疹类病毒高度同源序列DNA多聚酶基因中设计两对通用引物 ,该引物能同时扩增单纯疱疹病毒Ⅰ型与Ⅱ型 (HSVI/HSVⅡ )、爱泼斯坦—马尔病毒 (EBV)、人巨细胞病毒 (CMV)、水痘 带状疱疹病毒 (VZV)和人类疱疹病毒 6型 (HHV6) 6种病毒。选择BstUI内切酶对PCR产物进行酶切。 98例怀疑病毒性脑炎、脑膜炎患儿的脑脊液标本用PCR RFLP和ELISA法进行检测。结果　 6种标准病毒株PCR扩增后产物为 5 10～ 5 92bp ,经酶切后能区分为何种病毒 ,其最小检出量为 0 1fg ,与乙肝病毒、真菌、细菌和人类基因组无交叉反应。用该方法检测临床 98份脑脊液标本中的疱疹类病毒 ,13份阳性 ,同时用ELISA法检测该标本 ,5例阳性。PCR阳性检出率为 13 3% ,ELISA为 5 0 9% (P <0 0 5 )。 2例患儿在院外阿昔洛韦已治疗 2～ 3d ,但入院后在其脑脊液中仍能检测到病毒DNA。 10例诊断为疱疹病毒感染患儿经更昔洛韦每天 10mg/kg ,分两次静脉注射治疗 14d后 ,8例临床症状明显好转 ,2例病情未见好转。结论　建立的疱疹类病毒特异的限制性内切酶图谱具有特异敏感 ,快速准确的特点 ,且不受抗病毒药物的影响 。

摘要：目的 :通过 PCR- RFLP、DNA克隆和测序分析来检测和区分 6种疱疹类病毒 ,探讨其在临床上的应用价值。方法 :在疱疹类病毒高度同源序列 DNA多聚酶基因中设计两对通用引物 ,一对扩增单纯疱疹病毒 1型和 2型、爱泼斯坦 -马尔病毒、人巨细胞病毒 4种病毒 ,另一对扩增水痘 -带状疱疹病毒和人类疱疹病毒 6型 2种病毒 ,经DNA PCR扩增 ,并对扩增产物进行分子克隆、序列分析后 ,选择 Bam H 或 Bst U 酶切扩增产物进行鉴别。最后 ,对临床 38份脑脊液 (CSF,临床诊断为病毒性脑炎的病例 )和 4 9份血标本 (其中 2 7份为确诊病例 ,2 2份为临床诊断病例 )进行疱疹病毒的检测。结果 :38份 CSF标本中 13份阳性 (34.2 % ) ,2 7份确诊病例标本均阳性 (10 0 % ) ,2 2份临床诊断病例标本 16份阳性 (72 .7% )。这些阳性标本通过 Bam H 或 Bst U 两种酶切后能明确系何种疱疹类病毒。 6 8例正常健康儿童的血和 9份非病毒感染的脑脊液标本 6种疱疹类病毒 DNA均为阴性。结论 :聚合酶链反应加限制性内切酶片段长度多态性分析为疱疹类病毒感染的临床诊断提供了一种有效的手段。

摘要：目的　快速检测 6种疱疹类病毒DNA。方法　在疱疹类病毒高度同源序列DNA多聚酶基因中设计两对通用引物 ,一对扩增单纯疱疹病毒Ⅰ型与Ⅱ型、爱泼斯坦 巴尔病毒和人巨细胞病毒 4种病毒 ,另一对扩增水痘 带状疱疹病毒和人类疱疹病毒 6型 2种病毒。经DNA聚合酶链反应(PCR)扩增 ,并对扩增产物进行分子克隆序列分析后 ,选择BamHⅠ或BstUⅠ酶切对扩增产物进行鉴别。结果　 6种标准病毒株PCR扩增后产物为 5 10～ 5 92bp ,其最小检出量为 0 .1fg ,与乙型肝炎病毒、真菌、细菌和人类基因组DNA无交叉反应。用该方法检测临床 89份脑脊液 (CSF)和 75份血标本中的疱疹类病毒 ,13份 (14 .6 % )CSF和 2 6份 (34.7% )血标本为阳性 ,通过BamHⅠ或BstUⅠ两种酶切后能明确系何种疱疹类病毒。同时用酶联免疫吸附 (ELISA)法检测该标本的HSVⅠ /Ⅱ、EBV和CMV这 4种病毒的IgM ,10例阳性。这 4种病毒的PCR阳性检出率为 30 .7% ,而ELISA法为13.3% (P <0 .0 5 ) ,具有显著的差异性。 38例正常健康儿童的血和 9份非病毒感染的CSF标本 6种疱疹类病毒DNA均为阴性。结论　PCR加限制性内切酶片段长度多态性分析具有特异敏感 ,快速准确的特点 ,为疱疹类病毒感染的早期快速诊断提供了有效的手段。

摘要：目的　建立 1种能快速区分 4种疱疹类病毒DNA的特异性酶切图谱。方法　在疱疹类病毒高度同源序列DNA多聚酶基因中设计 1对通用引物 ,该引物能同时扩增单纯疱疹病毒Ⅰ型与Ⅱ型 (HSVI/Ⅱ )、爱泼斯坦 巴尔病毒 (EBV)、人巨细胞病毒 (CMV) 4种病毒。选择BamHI和BstUI 2种内切酶对同一PCR产物进行酶切 ,建立了能区分 4种疱疹类病毒的PCR限制性内切酶片段长度多态性分析 (RFLP)法。采用PCR RFLP和ELISA法 ,对 75例怀疑病毒感染的患儿和 38名健康儿童的血标本进行上述 4种病毒DNA及IgM抗体检测。结果　 4种标准病毒株PCR扩增后产物为 5 10～ 5 92bp ,经酶切后能区分病毒种类 ,其最小检出量为 0 1fg ,与乙型肝炎病毒、新型隐球菌、金黄色葡萄球菌、大肠埃希氏菌和人类基因组DNA无交叉反应。用该方法检测临床 75份血标本 ,阳性 2 3份 ,其中CMV、EBV和HSVⅡ感染分别为 13、4和 5例 ,HSVI为 1例 ,同时用ELISA法检测该标本 ,10例阳性 ,分别为CMV5例、EBV3例和HSVⅡ 2例。在 38例健康体检儿童的血标本中上述 4种病毒DNA及IgM抗体均为阴性。结论　本研究建立的 4种疱疹类病毒特异性酶切图谱具有特异敏感 ,快速准确的特点 ,能检测到ELISA法不能检测到的疱疹病毒感染。

摘要：目的评价婴儿巨细胞病毒感染中聚合酶链反应(PCR)加限制酶分析的应用价值。方法在巨细胞病毒(CMV)DNA多聚酶基因中设计一对引物,对CMV进行PCR扩增、分子克隆、序列分析后,选择BstUI进行酶切以鉴别扩增产物。结果巨细胞病毒PCR扩增后产物为592bp,经BstUI酶切后证实为CMVDNA,其最小检出量为01fg,与乙肝病毒、真菌、细菌和人类基因组无交叉反应。用该方法检测临床32份血和5份脑脊液标本中的CMV,12份血和1份脑脊液标本阳性;同时用ELISA法检测血标本,5例阳性。PCR阳性检出率为375%,ELISA为156%(P<005)。9例诊断为CMV感染患儿经更昔洛韦治疗10～14天后,复查外周血巨细胞病毒DNA,有1例仍为阳性。结论PCR加限制酶分析能提高婴儿巨细胞病毒感染的诊断率。更昔洛韦可作为抗CMV感染的有效药物。