摘要：井巷掘进揭煤时,较好的施工方法是震动放炮,金属骨架,钻孔排放和水力冲孔,尤以震动放炮为主。而震动放炮的实质就是利用爆破产生的强烈震动和大量的爆生裂隙来诱导煤和沼气突出,或释放煤层中积聚的瓦斯,使其压力降低,从而降低煤和瓦斯突出的强度,甚至完全避免突出。据此,实施立井掘进穿过煤层时,在检测和分析煤层内瓦斯的赋存情况后,先行钻孔排放以降低瓦斯压力和喷出速度,然后安设金属骨架,在其保护下,采用震动放炮的方法全断面一次揭开煤层。对震动放炮揭煤的爆破参数、起爆网络等进行了精心设计与施工,安全顺利地揭开了煤层。

摘要：针对综掘巷道遇坚硬岩石切割效率低、刀具消耗量大、掘进速度慢、成本增加的状况,提出先进行深孔松动预裂爆破,再进行掘进机切割的施工方案。根据现场岩性,在理论分析计算的基础上,进行深孔爆破参数设计,并在淮北朱仙庄矿进行试验,结果表明,炮孔周围径向裂纹可见长度300～400mm,岩石结构损伤、整体强度降低,有利于掘进机切割;平均每班可多进尺0.4～0.5m,切割速度提高20%～40%,刀具消耗降低了30%～40%;同时,减少了粉尘,改善了工作环境,试验研究取得了良好的效果。

摘要：在经济转型、经济增速放缓大背景下,高校毕业生就业已经成为各级政府就业工作的重点、社会广泛关注的热点。以高校毕业生为主体建设创业孵化基地,培养创业人才,可以鼓励大学生创业,对缓解就业压力、培养青年人的创新精神和促进科技成果转化具有重要作用。

摘要：根据现场围岩变形实测数据,发现软岩巷道围岩蠕变能力随软岩层厚度减少而逐渐减弱的特点,提出了软岩巷道围岩蠕变"滞流效应"的观点。基于软硬岩层间摩擦阻力及围岩质点位移约束应力的作用,分析了"滞流效应"发生的力学机理。利用动态仿真技术得到了围岩发生"完全滞流"所对应的临界条件,给出了临界厚度的确定方法。在上述研究的基础上,较为深入地剖析了"让压"的本质原理,指出了"让压"原理的适用性,补充与完善了"二次支护"的内在含义。最后借助于现场工业性试验论证了"滞流效应"的研究对巷道支护方案设计的重要性。

摘要：目标管理机制运行效率的发挥依赖于组织类型、产出与绩效的可量化评价程度、员工的素质水平等环境要素。高校与企业在管理目标、产出与绩效评价、组织运行结构、员工工作的协同性等方面存在根本性差异,这决定了高校应当遵循与企业不同的目标管理机制构建逻辑。基于自身特定的组织环境约束,高校的目标管理机制应当坚持以下优化方向:根据不同的岗位类型设计差异化的指标体系,兼顾业绩考核指标与态度能力考核指标,在绩效考核中不过分追求定量指标的使用。

摘要：背景:小胶质细胞在一些神经系统疾病如帕金森病、阿尔茨海默病中有重要作用。体外原代培养是进行小胶质细胞功能研究的基础,但目前常用的一些经典培养方法存在步骤繁琐、产量过低的问题。目的:建立一种简易高产量的原代小胶质细胞体外纯化培养方法。设计:以细胞为单一样本的探索性研究。单位:华中科技大学同济医学院附属协和医院神经内科。材料:实验于2004-04/10在协和医院中心实验室完成,新生(出生1d)昆明小鼠10只,雄性。方法:改进的培养方法以McCarthy等的经典培养方法为基础,通过提高初次接种密度,减少细胞离心过滤过程,进行不换液的营养缺失培养等重要改进,并使用低浓度胰酶-乙二胺四乙酸消化法分离纯化小胶质细胞,经MAC-1抗体免疫化学染色标记,计算MAC-1抗原阳性细胞,观察小胶质细胞培养的产量和纯度。主要观察指标:①倒置显微镜观察小胶质细胞形态。②免疫组织化学鉴定比较两种方法下小胶质细胞纯度、激活状态。结果:经典的McCarthy培养方法小胶质细胞培养周期为20d,产量为2×105个/瓶,细胞纯度为95%～97%;改进的方法小胶质细胞培养周期为15d,产量为1×106个/瓶,得到的小胶质细胞纯度为96%～98%。与经典的McCarthy培养方法比较,改进的方法周期短,产量提高了3～10倍。两种方法培养的小胶质细胞纯度和细胞激活状态没有明显差别。结论:新方法得到的小胶质细胞纯度与激活状态均与经典方法相似,但由于其步骤简单,周期短和有效提高了培养产量,为进行小胶质细胞功能特性以及在神经修复中作用的深入研究提供了良好的方法学基础。

摘要：勿让典型贬值董继华培养和树立好的典型，就等于在群众中树起了一支标杆，就象一面迎风招展的旗帜，在队伍前面起着导向、榜样的作用。一个好的典型，可以凝聚人心，鼓舞斗志，振奋精神，推动工作。为此，毛泽东同志要求全党干部要做到胸中有全局，手中有典型，倡导运用典...

摘要：目的:构建并筛选肿瘤坏死因子受体相关因子6(TRAF6)短发夹RNA(shRNA)表达质粒.方法:针对小鼠TRAF6 mRNA设计4条理论上最佳的siRNA序列,经退火成互补双链,将相应双链DNA插入pGCsi-U6/GFP/Hygro质粒中,构建重组表达质粒pGCsi-TRAF6-shRNA1,2,3,4,并以不同比例DNA质粒/脂质体转染重组质粒(1∶2、2∶5、1∶3和1∶4)至RAW264.7细胞中,观察转染效果.结果:靶向TRAF6 mRNA的4个shRNA重组质粒载体pGCsi-TRAF6 shRNA1,2,3,4,经测序分析,shRNA编码序列与设计的片段完全一致,证实载体构建成功.应用荧光显微镜分析转染效率显示,DNA(g)/脂质体转染重组质粒(L)按1∶2、2∶5、1∶3和1∶4比例转染细胞的效率分别为13.7%±1.2%、24.5%±2.1%、19.3%±1.7%、16.3%±2.8%,以2∶5为最佳比例.只加了脂质体未加质粒(试剂对照)的细胞无荧光表达.结论:TRAF6靶向RNA干扰重组表达质粒构建成功,为进一步研究阻断TRAF6表达对急性肝衰竭过度炎症反应的基因治疗奠定基础.

摘要：目的研究培养Hep-2细胞中,靶向血管内皮生长因子(vascularendothelialgrowthfactor,VEGF)的小干扰RNA表达框架(smallinterferenceRNAexpressioncassettes,SECs)对肿瘤细胞生长的影响,检测VEGF基因表达的情况,筛选最佳干扰序列,探讨RNAi技术在肿瘤基因治疗中的应用前景。方法根据siRNA靶序列设计原则,设计出VEGF4个位点的干扰序列,然后进行合成,即为siRNA表达框架的下游引物。由于干扰试剂盒中采用RNA介导的U6聚合酶Ⅲ启动子和改良的终止序列,从而在靶细胞内可以高水平及精确地表达siRNA。我们将4个位点的PCR产物分别转染指数生长期的Hep-2细胞,48h开始观察和检测所产生的RNA干扰的效果。结果形态学检测:转染后的1366位点的细胞可见皱缩、变圆并开始脱落,而其他三个位点的细胞形态学上未见明显的改变;逆转录-聚合酶链反应产物进行琼脂糖凝胶电泳,与对照组相比,1366位点细胞VEGFmRNA明显被抑制,吸光度为0·05,而其他三个位点的抑制效果不显著,吸光度分别是0·25、0·30和0·18。Westernblot分析表明:与其他三个位点相比,1366位点的VEGF蛋白表达明显减弱;流式细胞仪检测表明:1366位点转染细胞的凋亡率为43%,而其他三个位点转染细胞的凋亡率改变不明显,分别为8·9%、6·5%和11·2%;本实验重复性强,同样的实验重复三次结果一致。结论研究表明靶向VEGF的1366位点的siRNA表达框架能高效抑制喉癌细胞株Hep-2细胞的生长。

摘要：目的构建靶向人肝素酶（HPSE）的短发卡状RNA（shRNA）表达载体，探讨其基因沉默作用。方法根据人肝素酶mRNA序列设计shRNA，合成两条互补的寡核苷酸链，退火后连接人pGenesil-1载体，转化扩增后进行测序鉴定；重组质粒在阳离子脂质体Lipofectamine2000的介导下，瞬时转染人胃癌细胞株SGC-7901、人前列腺癌细胞株PC-3、人膀胱癌细胞株EJ，每种细胞分别设空白对照组、空载体pGenesil-Negative转染组、pGenesil-HPSEshRNA转染组3组，逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）及Westernblot法检测各种细胞中肝素酶基因表达水平，黏附实验和transwell小室实验检测癌细胞游走、侵袭能力。结果所构建的shRNA载体插入基因片段与设计序列完全匹配，载体构建成功；重组质粒转染SGC-7901、PC-3、EJ细胞后，肝素酶mRNA表达分别下调78．6％（P〈0．01）、82．6％（P〈0．01）、81．9％（P〈0．01），肝素酶蛋白表达分别下调76．4％（P〈0．01）、85．9％（P〈0．01）、83．3％（P〈0．01），细胞黏附能力分别下降37．7％（P〈0．01）、44．6％（P〈0．01）、43．8％（P〈0．01），细胞侵袭能力分别下降66．8％（P〈0．01）、76．6％（P〈0．01）、80．5％（P〈0．01）。结论成功构建了靶向人肝素酶的shRNA表达载体，沉默肝素酶基因表达后，能抑制多种癌细胞的游走和侵袭能力。