摘要：设计并合成针对人MEKK2基因3个不同部位siRNA靶点的模板DNA序列,将合成的互补片段退火后克隆入pRNAT-H1.1/Adeno穿梭载体中,并使其在大肠杆菌BJ5183中与腺病毒骨架质粒pAdEasy-1进行同源重组。将经鉴定正确的重组腺病毒质粒转染293A细胞,包装得到具有感染能力的pAd-MEKK2-siRNA重组腺病毒。病毒体外转导人胃腺癌AGS细胞,Western blot印迹法检测其对MEKK2表达的抑制。经酶切和测序鉴定均证实pAd-MEKK2-siRNA重组腺病毒载体构建成功,其插入序列正确无误。Western blot印迹检测结果显示,重组腺病毒表达载体可抑制MEKK2基因的表达,以pAd-MEKK2-siRNA2(针对MEKK2 cDNA 992-1 010的片段)抑制效果为最佳,pAd-MEKK2-siRNA1(针对MEKK2 cDNA 1 456-1 474的片段)和pAd-MEKK2-siRNA3(针对MEKK2 cDNA 1 351-1 369的片段)则未见明显的抑制效果。DNA Ladder和细胞存活测定结果表明,敲减MEKK2的表达后,AGS细胞接受H2O2刺激后的凋亡受到较强抑制、细胞存活数增加,明显高于野生型细胞和转导siRNA阴性对照腺病毒细胞接受H2O2刺激后的,差异具有统计学意义(P0.05)。该研究成功地构建了针对MEKK2基因的siRNA重组腺病毒载体,为进一步深入研究MEKK2基因在人胃腺癌细胞中的作用和功能奠定了基础。

摘要："五步营造法"是构建城市泛景观系统的五大策略,符合认识事物从整体到局部、从客观到主观、从掌握规律到转化变通的一般规律,用于指导项目的实践。以江门人才岛项目为例,结合城市泛景观"五步营造法",把握区域及城市发展大势,立足生态,因地制宜。通过传承肌理、串联水脉、连通成环、有机生长、组团布局五大策略,营造人才岛的生境、画境、意境和人境之美。实现从项目策划、建设到运维全过程参与,促进城市经济社会发展全面绿色转型,建设人与自然和谐共生的现代化,将江门人才岛打造成新时代背景下城市建设的先行示范标杆,实现"绿水青山、景城合一"的城市新意向。

摘要：研究AKT2基因对H2O2诱导的乳腺癌细胞凋亡的影响.RT-PCR扩增人AKT2基因全长cDNA序列后克隆入pcDNA3.1/myc-His(-)A质粒中,构建AKT2基因的真核表达载体(野生型,WT-AKT2);应用QuikChange定点诱变,制备AKT2激酶活性丧失的负性表达载体(DN-AKT2).WT-AKT2和DN-AKT2分别转染人乳腺癌MCF-7细胞,新霉素筛选稳定转染细胞克隆;设计并合成针对人AKT2基因2个不同部位的siRNA片段,转染入同样的细胞.通过TUNEL和DNA ladder测定,研究转染AKT2基因及AKT2 siRNA前后细胞对H2O2诱导凋亡的抵抗作用.测序鉴定证实,WT-AKT2和DN-AKT2表达载体构建成功.Western印迹结果显示,WT-AKT2和DN-AKT2基因在MCF-7细胞中表达良好,而AKT2 siRNA则可有效地抑制AKT2的表达;TUNEL和DNA ladder测定结果表明,WT-AKT2表达上调的稳定克隆组,可显著提高MCF-7细胞对H2O2诱导的凋亡的抵抗作用(转染DN-AKT2具相反作用).经H2O2作用后,其凋亡细胞数显著低于空载体稳定转染克隆及未转染亲代细胞的,差异具有统计学意义(P0.05).AKT2抑制乳腺癌细胞对H2O2诱导凋亡的作用可被AKT2 siRNA和PI3K/AKT信号途径抑制剂wortmannin所阻断.内源性的结果进一步证明了AKT2的功能.本研究表明,AKT2能够抑制H2O2诱导的MCF-7人乳腺癌细胞凋亡,可能成为乳腺癌治疗的靶点之一,并为研究乳腺癌细胞抵抗活性氧诱导的细胞凋亡的分子机制奠定了基础.

摘要：基于城市泛景观理论体系,从泛景观理论体系的主要作用力"泛景观力"的宏观、中观、微观3个层面出发,提出泛景观系统构建的"五步营造法"策略,即"寻此势""明远道""营四境""优两术""理五微",并经过多个项目实践论证得出此策略符合认识事物从整体到局部、从客观到主观、从掌握规律到转化变通的一般规律,可用于指导项目实践。

摘要：目的构建人MEKK3基因的小干扰RNA（siRNA）重组腺病毒载体表达载体，观察其在胃腺癌AGS细胞中对MEKK3的表达抑制。方法设计并合成针对人MEKK3基因3个不同部位siRNA靶点的模板DNA序列，以MluI及XhoI克隆入pRNAT—H1．1／Adeno穿梭载体中，得到的质粒用Pme I线性化后在大肠埃项菌BJ5183中与腺病毒骨架质粒pAdEasy-1进行同源重组。卡那霉素筛选后，用PacI酶切鉴定。鉴定正确的质粒经Pac I酶切、乙醇沉淀后转染293A细胞，包装得到具有感染能力的pAd—MEKK3-siRNA重组腺病毒。病毒体外转导人胃腺癌AGS细胞，Western印迹法检测其对MEKK3蛋白表达的抑制。结果酶切和洲序鉴定表明3个MEKK3 siRNA重组腺病毒表达载体正确无误。Western印迹检测结果显示3个pAd—MEKK3-siRNA重组腺病毒表达载体中有两个可有效地抑制胃腺癌AGS细胞中MEKK3基因的表达，其中以***3-siRNA3的抑制作用最显著，有效率达89％。结论成功构建了针对MEKK3基因的siRNA重组腺病毒载体，为进一步研究MEKK3基因在人胃腺癌AGS细胞中的作用和功能奠定了基础。

摘要：目的构建人MEKK3基因的小干扰RNA（siRNA）表达载体并建立稳定沉默MEKK3基因表达的肺癌A549细胞克隆株。方法设计并合成针对人MEKK3基因4个不同部位siRNA靶点的模板DNA序列，以BamHI及Hindm酶切位点分别克隆入pSilencer4．1-CMVhygro载体，测序鉴定后以脂质体分别转染入A549细胞，Western印迹检测它们对MEKK3表达的抑制，并选择抑制效率最高的表达载体转染入A549细胞，潮霉素筛选后获得含该载体的抗性细胞克隆株，荧光实时定量PCR检测该细胞克隆株中MEKK3表达抑制。结果测序鉴定表明4个MEKK3siRNA表达载体正确无误；Western印迹结果显示对MEKK3的表达有抑制作用，其中pSilencer4．1-MEKK3siRNA2的抑制率达84％；荧光实时定量PCR结果表明，pSilencer4．1-MEKK3siRNA2可稳定沉默MEKK3mRNA的表达，有效率达83％。结论成功地构建了针对人MEKK3基因的siRNA表达载体，并成功地建立了能高效且稳定地沉默MEKK3基因表达的肺癌A549细胞克隆株。