摘要：目的用基因工程的方法克隆表达丙酮酸脱氢酶复合体E2(PDC-E2)融合蛋白,以用于人原发性胆汁性肝硬化(PBC)的早期发现和临床诊断。方法针对PDC-E2的cDNA序列设计引物,从正常人的淋巴细胞中提取RNA,通过反转录PCR方法扩增得到相应的基因片段,经测定序列验证后插入表达载体pET28a(+),构建重组表达载体pET28a(+)-PDC-E2,转化大肠杆菌BL21(DE3)后诱导表达蛋白质。表达蛋白经SDS-PAGE、Western blot鉴定。结果经核苷酸序列测定和酶切鉴定结果表明,成功地构建了PDC-E2重组质粒。IPTG诱导表达后,获得PDC-E2融合蛋白。经免疫学鉴定,重组抗原片段具有抗线粒体抗体二亚型(AMA-M2)的免疫原性。结论获得PBC特异性靶抗原的多肽片段,为PBC的早期发现和临床诊断提供有力工具。

摘要：抗结核病的保护性免疫机制目前仍不清楚，细胞免疫尤其是循环及感染部位的T淋巴细胞应答被认为起着重要作用。我们采用分子生物学的方法重组表达了结核分枝杆菌保护性肽表位KLIANNTRV二聚体、四聚体和八聚体，并采用结核菌素纯蛋白衍生物（PPD）试验阳性健康个体的外周血单个核细胞验证其免疫原性，为设计新型结核疫苗奠定良好的基础。

摘要：目的评价达亚美Techno TwinStation全自动血型仪在交叉配血中的准确性。方法用达亚美Techno TwinStation全自动血型仪对4 500例患者样本进行交叉配血,并与传统的抗人球蛋白试管法、聚凝胺法进行对照试验。结果 (1)200份抗体筛查阴性的标本,三种方法交叉配血试验结果完全相符;4 280份抗体筛查阴性的标本,全自动血型仪和聚凝胺法交叉配血试验结果完全相符;(2)20份抗体筛查阳性标本,交叉配血试验结果为:全自动血型仪法20例不相容,聚凝胺法16例不相容,抗人球蛋白试管法18例不相容,结果比较无统计学差异(P>0.05)。结论达亚美Techno TwinStation血型仪用于交叉配血检测,结果可靠,实验操作规范化、标准化,降低了人为错误的发生率;实验结果可永久保存,便于查询和医疗举证。

摘要：目的比较3种全自动血型仪用于交叉配血试验的准确性和敏感性。方法随机将1台全自动血型仪检测出的交叉配血阳性患者和相应献血者标本,置另外2台全自动血型仪进行交叉配血试验,共计80对交叉配血标本,用经典抗人球蛋白配血法进行交叉配血验证。分析不同仪器的假阳性率,并进行比较。结果达亚美、强生、戴安娜3种全自动血型仪用于交叉配血试验的敏感性较高,假阳性率分别为8.97%、11.25%、10.13%,经分析,差异无统计学意义(P>0.05)。结论 3种全自动血型仪应用于临床交叉配血试验较敏感,均有一定程度的假阳性率。对于仪器交叉配血显示的弱阳性结果,需用经典抗人球蛋白配血法进行验证。

摘要：目的:评价IH-1000全自动血型仪在交叉配血中的准确性。方法:采用IH-1000全自动血型仪对1 200例患者样本进行交叉配血,并与传统的抗人球蛋白配血法、聚凝胺配血法进行对照试验。结果:①100份抗体筛查阴性的标本,3种不同交叉配血方法的试验结果完全相符;②1 082份抗体筛查阴性的标本,交叉配血试验结果为:全自动血型仪法30例次侧不相容,抗人球蛋白试管法25例次侧不相容,差异无统计学意义(P>0.05);③18份抗体筛查阳性标本,交叉配血试验结果为:全自动血型仪法18例不相容,聚凝胺法16例不相容,抗人球蛋白试管法17例不相容,差异无统计学意义(P>0.05)。结论:IH-1000血型仪用于交叉配血检测,结果可靠,可永久保存,操作规范化、标准化,降低了人为错误的发生率。

摘要：目的观察血浆置换(PE)治疗重症类风湿性关节炎(RA)临床疗效。方法采用0.9%NaCl、706代血浆、病毒灭活血浆组成的置换液治疗52例重症RA患者,并与常规药物治疗45例重症RA患者组进行比较,分析两组患者治疗前后血清中IgG、IgA、IgM、C3、C4、C1q、CIC、CRP、ESR、RF共10项实验室指标的变化,并观察和统计患者血浆置换过程中的不良反应情况。结果重症RA患者经血浆置换后,血清中的IgG、IgA、IgM、C3、C4、C1q、CIC、CRP、ESR、RF较血浆置换前明显降低(P<0.05),患者临床症状明显改善;药物对照组治疗后,血清中仅有IgG、C1q、RF共3项指标较治疗前明显降低(P<0.05)。血浆置换组患者的总有效率为96.2%,高于药物治疗组患者75.5%的总有效率(P<0.01)。208次血浆置换过程中发生15次不良反应(发热反应8次,过敏反应4次,低钙血症3次),不良反应发生率为7.2%,症状均较轻,对症处理后好转。结论血浆置换治疗重症RA的疗效肯定,安全性较好。

摘要：目的鉴定结核杆菌(Mycobacterium tuberculosis,Mtb)抗原Rv0173中的HLA-A*0201限制性CTL表位。方法应用数据库SYFPEITHI预测结核杆菌Rv0173中可能存在的HLA-A*0201限制性CTL表位,经流式细胞术分析各抗原肽与HLA-A*0201的亲合力,经时间分辨荧光法检测外周血单个核细胞(PBMCs)对各抗原肽产生的增殖反应,经细胞毒性实验研究各抗原肽诱导的特异性T细胞的细胞毒杀伤活性,逐步鉴定Rv0173的HLA-A*0201限制性CTL表位。结果位于Rv0173氨基酸序列肽3(21-30aa)和抗原肽7(161-170aa)与HLA-A*0201分子具有较高的亲合力,并都能刺激HLA-A*0201阳性个体PBMCs增殖,并诱导产生特异性杀伤活性。结论肽3(RLSQSADQYL)(21-30aa)和肽7(LLRGGGLVNL)(161-170aa)是抗原Rv0173上HLA-A*0201限制性CTL的优势表位,可作为结核疫苗设计的候选表位。

摘要：目的预测及鉴定新的HLA-A*0201结核分枝杆菌(Mycobacterium tuberculosis,Mtb)抗原Ag85A中的CD8+CTL优势表位。方法应用数据库SYFPEITHI预测可能存在的HLA-A*0201的限制性CD8+CTL表位,并经流式细胞术分析抗原肽与HLA-A*0201的亲和力、经时间荧光分辨法检测结核(TB)患者外周血单个核细胞(PBMCs)对抗原肽的增殖反应,再通过细胞毒实验研究抗原肽诱导的T细胞毒杀伤活性,逐步鉴定Ag85A的HLA-A*0201限制性CD8+CTL表位。结果位于Ag85A氨基酸序列(48-56)的肽表位与HLA-A*0201分子具有较高的亲和力,并能刺激HLA-A*0201阳性结核患者PBMC增殖,诱导产生具有特异性杀伤活性的CTL。结论肽6(GLPVEYLQV,48-56aa)是Mtb抗原Ag85A的HLA-A*0201限制性CD8+CTL的优势表位,这为今后进一步研究结核杆菌,作为设计结核疫苗的候选表位奠定了一些基础。

摘要：目的重组表达抗线粒体抗体二亚型(AMA-M2)的二个靶抗原丙酮酸脱氢酶复合体E2(PDC-E2)、2-氧戊二酸脱氢酶复合体E2(OGDC-E2)及其连接形成的二联体PO-E2融合蛋白,已用于人原发性胆汁性肝硬化(PBC)的早期发现和临床诊断。方法针对PDC-E2,OGDC-E2的cDNA序列设计引物,从正常人的淋巴细胞中提取RNA,通过反转录PCR方法扩增得到相应的基因片段,经测定序列验证后插入表达载体pET28a(+),构建重组表达载体,pET28a(+)-PDC-E2,pET28a(+)-OGDC-E2,pET28a(+)-P0-E2,转化大肠埃希菌BL21(DE3)后诱导表达蛋白质。表达蛋白经SDS-PAGE,Western-blot等鉴定。结果经核苷酸序列测定和酶切鉴定结果表明,成功地构建了三种重组质粒。IPTG诱导表达后,获得三种融合蛋白。经免疫学鉴定,重组抗原片段具有AMA-M2的免疫原性。结论重组表达的PO-E2融合蛋白将有利于原发性胆汁性肝硬化的实验室诊断。

摘要：目的克隆表达抗线粒体抗体二亚型(AMA-M2)的二个靶抗原侧链2-氧酸脱氢酶复合体E2(BCOADC-E2)、丙酮酸脱氢酶复合体E2(PDC-E2)及其连接形成的二联体BP-E2融合蛋白,用于人原发性胆汁性肝硬化(PBC)的早期临床诊断。方法根据BCOADC-E2,PDC-E2的cDNA序列设计引物,从正常人的淋巴细胞中提取RNA,通过RT-PCR方法扩增得到相应的基因片段,经测定序列验证后插入表达载体pET28a(+),构建重组表达载体pET28a(+)-BCOADC-E2,pET28a(+)-PDC-E2,pET28a(+)-BP-E2,转化大肠杆菌BL21(DE3)后诱导表达蛋白质。表达蛋白经SDS-PAGE,Western blot等鉴定。结果经核苷酸序列测定和酶切鉴定结果表明,成功地构建了三种重组质粒。IPTG诱导表达后,获得三种融合蛋白。经免疫学鉴定,重组抗原片段具有AMA-M2的免疫原性。结论重组表达的BP-E2融合蛋白将有利于原发性胆汁性肝硬化(PBC)的实验室诊断。