摘要：目的建立血浆虫草素及代谢物3’-脱氧肌苷(3′-Deo)的液相色谱-串联质谱(LC-MS/MS)测定方法,研究其在大鼠体内的药动学。方法以2-氯腺苷(2-Chl)为内标,甲醇沉淀蛋白,色谱柱为Kinetex C18(3 mm×100 mm,2.6μm),流动相为水(5 mmol·L^(-1)乙酸铵)-甲醇溶液,梯度洗脱。电喷雾离子源,正离子多反应监测。研究大鼠灌胃虫草素(10 mg·kg^(-1))后血浆虫草素及3′-Deo药动学。结果虫草素和3′-Deo分别在0.5~100和1~200 ng·mL^(-1)范围内线性关系良好,定量下限分别为0.5和1 ng·mL^(-1)。大鼠灌胃虫草素后,血浆虫草素浓度较低,主要转化为3′-Deo。虫草素和3′-Deo的峰浓度(C_(max))分别为(5.4±3.4)和(142.0±50.0)ng·mL^(-1),血药浓度-时间曲线下面积(AUC_(0-360 min))分别为(658.4±459.3)和(18034.9±4981.1)ng·min·mL^(-1)。结论该方法简单、灵敏、准确,适用于虫草素与3′-Deo血药浓度测定及药动学研究。

摘要：目的建立实时荧光定量聚合酶链反应（PCR）检测协同刺激分子B7-H4基因表达的方法。方法采用自行设计的检测协同刺激分子B7-H4及内参照基因GAPDH的引物及TaqMan探针，经优化反应体系及反应条件后，检测B7-H4及GAPDH的基因表达。将B7-H4和内参照基因GAPDH的PCR扩增产物经测序鉴定正确并纯化后分别与pMDl9-T载体连接，克隆构建含B7-H4及GAPDH基因片段的重组质粒，作为实时荧光定量PCR检测B7-H4及GAPDH基因表达的标准品。将重组质粒标准品进行定量及梯度稀释，建立标准曲线。结果PCR扩增产物分别经测序证实为B7-H4及GAPDH基因的特异性片段。该法检测B7-H4基因表达的灵敏度为527copies／ml，线性范围为5．27X×10^2～5．27×10^7copies／ml，标准曲线方程为：Y=-3．1395X＋41．805，直线回归相关系数r=0．995，批间变异系数范围为2．39％～3．59％，扩增效率108．2％。该法检测GAPDH基因表达的灵敏度为386copies／ml，线性范围为3．86×10^2～3．86×10^7 copies／ml，标准曲线方程为：Y=-3．2436X＋41．083，直线回归相关系数r=0．999，批间变异系数范围为2．26％～3．86％，扩增效率103．4％。结论成功构建实时荧光定量PCR检测协同刺激分子B7-H4基因表达的方法，该方法特异性好、灵敏度高、重复性好。

摘要：结直肠癌(CRC)是最常见、致死率最高的肿瘤之一。嵌合抗原受体T(CAR-T)细胞治疗在CRC中未能重现其在血液肿瘤和部分实体瘤治疗中获得的成功,其原因除CAR-T细胞治疗本身的研发困境(肿瘤抗原的异质性、特异性抗原的缺少等)外,CRC肿瘤微环境(TME)中存在着多重物理和生化障碍限制了T细胞抗肿瘤作用:TME复杂的脉管系统、纤维性物理屏障影响T细胞的迁移、抑制性细胞如Treg细胞、髓源性抑制细胞(MDSC)抑制抗肿瘤免疫反应、富集的免疫抑制性细胞因子影响T细胞的激活、肿瘤细胞通过代谢重编程影响T细胞的存活和功能等。优化CAR结构设计、构建靶向TME中免疫抑制因素的CAR-T细胞和其他治疗手段联合治疗等策略是克服CAR-T细胞治疗应用于CRC解决低响应率的关键性思路,将为靶向TME的精准免疫治疗深入发展提供线索和方向。

摘要：嵌合抗原受体T(CAR-T)细胞治疗是通过基因修饰获得携带识别肿瘤抗原特异性受体T细胞的个性化治疗方法。近年来,CAR-T细胞治疗在血液系统肿瘤的治疗中取得了巨大的成功,在实体瘤治疗方面也取得了一定进展。肺癌是世界上发病率最高的恶性肿瘤之一,而非小细胞肺癌(NSCLC)占多数且疗效差。CAR-T细胞治疗NSCLC主要在下述多个方面取得进展,包括CAR-T细胞分子结构的不断优化设计、CAR-T细胞治疗NSCLC的潜在靶标(如PD-L1、B7H3、MSLN、EGFR、PSCA、MUC1和LUNX)的发现、CAR-T细胞治疗联合放射治疗与化学治疗的机制与临床前动物实验的效果等。CAR-T细胞治疗NSCLC也存在许多困难,如CAR-T细胞在实体瘤中浸润性差、肿瘤特异性抗原缺乏、严重副作用的发生等。

摘要：目的评价新型肿瘤标志物甲胎蛋白-IgM免疫复合物（AFP-IgM）对原发性肝细胞癌（PHC）的诊断意义。方法用酶联免疫吸附法与电化学发光法分别检测103名健康人、74例原发性肝细胞癌、27例中度肝硬化和63例慢性肝炎患者血清AFP-IgM与甲胎蛋白（AFP）含量。以非肝癌组（健康人、中度肝硬化和慢性肝炎）作为对照组。结果AFP的ROC曲线下面积大于AFP-IgM（0．85vs0．72，Z=3．21），并应用ROC曲线确定AFP-IgM和AFP的临界值分别为3×10^5AU／L和10μg／L。在此临界值下，AFP-IgM和AFP对PHC的敏感度分别为64．9％和79．7％，特异度分别为75．6％和80．3％，两者的有效性相近；但对早期（Ⅰ与Ⅱ期）肝癌诊断时，AFP-IgM的ROC曲线下面积大于AFP（0．91vs0．82，Z=1．73），差异具有统计学意义，其敏感度分别为94．4％和72．2％，特异度分别为81．9％和79．9％；联合检测以两项均为阳性诊断原发性肝癌：特异度可达89．1％，有效性为79．0％。结论采用AFP联合AFP-IgM检测可提高PHC诊断的特异度和有效性，但对于原发性肝癌的早期诊断AFP-IgM的敏感度与特异度均比AFP更高，AFP-IgM对原发性肝癌的早期诊断更具重要意义。