摘要：目的利用环介导恒温扩增技术,以空肠弯曲菌的VS1基因设计引物,建立快速检测空肠弯曲菌的方法,以期能应用于急性腹泻和肠炎等疾病的快速检验。方法①通过基因比对与引物设计,设计针对空肠弯曲菌的环介导恒温扩增检测(LAMP)方法;②用钙黄绿素、亚甲基蓝、结晶紫、溴化乙锭4种DNA染料对扩增产物进行染色,评价各染料染色效果;③检测该LAMP方法对空肠弯曲菌及其他干扰菌的扩增情况,评价其特异性;④将该LAMP方法与培养法比较,进行统计学分析。结果①设计出针对空肠弯曲菌的LAMP检测方法;②钙黄绿素与扩增产物结合后颜色变化明显,是该LAMP方法中较好的DNA染料物质;③本LAMP检测方法只针对空肠弯曲菌有扩增,对其他干扰菌不扩增,显示出良好的特异性;④试验共检测了60株临床和标准菌株,对于菌株的培养物,LAMP检测结果与培养鉴定法比较差异无统计学意义(χ2=0.3333,P>0.05)。结论本试验设计出了针对空肠弯曲菌LAMP检测方法,该LAMP法较好的DNA染料物质是钙黄绿素,该方法具有良好的特异性,与培养鉴定法比较具有较高的阳性、阴性及总体符合率,能够用于空肠弯曲菌的快速检验。

摘要：目的设计23S rRNA通用引物并将其用于气性坏疽快速检测基因芯片。方法 (1)设计23S rRNA通用引物,并对气性坏疽的主要致病菌进行聚合酶链反应(PCR)扩增。(2)对外伤感染中常见其他微生物进行检测。(3)测定该通用引物PCR的灵敏度。结果 (1)设计出1对23S rRNA通用引物,该通用引物对气性坏疽主要病原菌都能进行扩增。(2)该通用引物PCR对外伤感染中常见非梭菌微生物都不扩增。(3)该通用引物PCR的最高灵敏度为1×103cfu/mL(产气荚膜梭菌)。结论设计出了1对23S rRNA通用引物,能够满足气性坏疽快速检测基因芯片的要求。

摘要：目的建立可用于粪便中艰难梭菌快速检测的环介导恒温扩增(LAMP)方法。方法针对艰难梭菌毒素A基因,设计引物。采用LAMP对艰难梭菌和其他腹泻干扰菌及不同浓度艰难梭菌的扩增检测,对其特异性和灵敏度进行评价。同时采用LAMP和荧光定量PCR对100例疑似艰难梭菌感染的临床腹泻患者粪便进行检测,对两种方法进行比较。结果 LAMP对艰难梭菌及6种腹泻干扰菌的检测,只针对艰难梭菌有扩增,显示了较好的特异性。LAMP最低检测限为10CFU/mL,灵敏度较高。对100例临床粪便标本LAMP检测结果与荧光定量PCR比较差异无统计学意义(P>0.05,χ2=0.1429)。结论本研究建立的粪便中艰难梭菌的LAMP快速检测方法特异性好、灵敏度较高、操作简便,适用于艰难梭菌的临床快速检测及现场检测。

摘要：目的利用环介导恒温扩增(LAMP)技术结合示差脉冲伏安(DPV)法,建立快速检测肺炎克雷伯菌的方法,并将其应用于小儿腹泻病原菌分析。方法通过基因比对与引物设计,建立针对肺炎克雷伯菌的LAMP检测方法。采用LAMP技术对肺炎克雷伯菌和其他8种干扰菌以及对不同浓度肺炎克雷伯菌进行扩增,结合DPV法评价其特异性及灵敏度。将200份腹泻患儿的粪便标本同时采用LAMP方法与培养法进行检验,对比2种方法检测肺炎克雷伯菌的阳性率。统计近2年该院门诊及住院小儿腹泻病例,初步分析其常见腹泻致病菌种类及比例。结果设计出针对肺炎克雷伯菌的LAMP检测方法,该法只针对肺炎克雷伯菌有扩增,对其他干扰菌不扩增,显示出良好的特异性,LAMP法最低检测限为10CFU/mL,显示出较高的灵敏度。200份腹泻患儿粪便标本,采用LAMP法与培养鉴定法检测的肺炎克雷伯菌阳性率差异无统计学意义(P>0.05)。近2年内该院小儿腹泻粪便标本中共检出致病菌709株,主要病原菌分别为志贺菌(34.23%)、大肠杆菌(15.40%)、铜绿假单胞菌(12.96%)、弗劳地枸橼酸杆菌(7.82%)、沙门菌(6.36%)、白色念珠菌(6.11%)、肺炎克雷伯菌(4.40%)、产气荚膜梭菌(3.67%)、变形杆菌(3.42%)、其他菌(5.63%)。结论设计出了针对肺炎克雷伯菌的LAMP检测方法,该法具有良好的特异性和较高的灵敏度,能够用于肺炎克雷伯菌的快速检验。

摘要：目的利用环介导恒温扩增技术(LAMP),设计快速检测伤寒杆菌的方法,研究其反应特性,以期能应用于临床现场检验。方法 (1)通过基因比对与引物设计,建立针对伤寒杆菌的LAMP检测方法。(2)根据该方法对伤寒杆菌及其他干扰菌进行检测时的扩增情况,对其特异性进行评价。(3)根据该LAMP方法对不同浓度伤寒杆菌的扩增情况,得出其最低检测限,对其灵敏度进行评价。结果该LAMP检测方法只针对伤寒杆菌有扩增,对其他干扰菌不扩增,显示出良好的特异性。该方法对伤寒杆菌的最低检测限为1×101CFU/mL,其灵敏度较高。结论本试验设计出了针对伤寒杆菌的LAMP检测方法,该LAMP检测方法具有良好的特异性和较高的灵敏度,能够用于伤寒杆菌的临床快速检测。

摘要：目的利用环介导恒温扩增技术,设计快速检测溶组织梭菌的方法,研究其反应特性,以期能应用于气性坏疽临床现场检验。方法通过基因比对与引物设计,设计针对溶组织梭菌的环介导恒温扩增检测(LAMP)方法。检测该LAMP方法对溶组织梭菌及其他干扰菌的扩增情况,对其特异性进行评价。(3)检测该LAMP方法对不同浓度溶组织梭菌的扩增情况,观察其最低检测限,对其灵敏度进行评价。结果设计出针对溶组织梭菌的LAMP检测方法。该LAMP检测方法只针对溶组织梭菌有扩增,对其他干扰菌不扩增,显示出良好的特异性。该LAMP检测方法对溶组织梭菌的最低检测限为1×101CFU/mL,显示其灵敏度较高。结论该试验设计出了针对溶组织梭菌的LAMP检测方法,该LAMP检测方法具有良好的特异性较高的灵敏度,能够用于溶组织梭菌的临床现场检验。

摘要：目的:利用环介导恒温扩增技术(LAMP),设计快速检测溶组织梭菌的方法,研究其反应特性,以期能应用于气性坏疽溶组织梭菌感染的临床现场检验。方法:通过基因比对与引物设计,设计针对溶组织梭菌的环介导恒温扩增检测方法。然后检测该方法对溶组织梭菌及其他干扰菌的扩增情况,对其特异性进行评价。检测该方法对不同浓度溶组织梭菌的扩增情况,对其灵敏度进行评价。最后与全自动细菌培养法进行比较,评价其与常规检测方法的可比性。结果:本LAMP检测方法只针对溶组织梭菌有扩增,对其他15种菌不扩增,显示出良好的特异性。对溶组织梭菌的最低检测限为1×101CFU/ml,显示其灵敏度较高。与全自动细菌培养法相比,有良好的可比性(P<0.05),很高的灵敏度(92.6%)、特异性(98.1%)及准确度(97.3%)。结论:本试验设计出了针对溶组织梭菌的LAMP检测方法,该LAMP检测方法具有良好的特异性较高的灵敏度,能够用于溶组织梭菌的临床现场检验。

摘要：目的研发能特异性结合穿孔素的DNA适配体并构建适配体电化学传感器,为发展穿孔素的新型检测技术提供基础。方法体外合成全长为81个碱基并含有35个随机寡核苷酸的单链DNA文库,库容量大约为1×1010,以穿孔素蛋白为靶标,利用指数富集配体系统进化技术(SELEX),从单链DNA文库中筛选能够结合穿孔素蛋白的DNA适配体;采用M-fold程序(version 3.2)预测二级结构;设计并构建适配体电化学传感器,进行穿孔素电化学特异性检测,绘制标准曲线。结果经多轮筛选,获得6条穿孔素蛋白的DNA适配体,分别为序列SEQ1~SEQ6,适配体SEQ6能够特异性结合穿孔素,并可通过电化学方法用于检测穿孔素,而其与牛血清清蛋白、γ-干扰素、肿瘤坏死因子α结合较弱。该电化学传感器检测穿孔素的线性水平范围为1~20nmol,检出限为0.7nmol。结论成功利用SELEX筛选获得特异结合穿孔素的DNA适配体,其在研发针对穿孔素的新型检测技术方面具有应用潜能。