摘要：背景:如何获取来源丰富的高质量人源性肝细胞是生物人工肝和肝细胞移植共同面临的问题。骨髓干细胞在适当条件下可分化为肝细胞,为获取肝细胞提供了新的思路。目的:探讨人骨髓干细胞在大鼠体内诱导分化为肝细胞的方法,为解决临床肝脏移植和生物人工肝来源提供新的思路。设计:随机对照实验。单位:南方医科大学珠江医院普通外科。材料:实验于2004-05/2005-02在南方医科大学珠江医院中心实验室完成。选取雄性清洁级SD大鼠40只,随机分为5组:单纯模型组、造模+人骨髓干细胞移植14d组、造模+人骨髓干细胞移植28d组、造模+CL-1细胞(人肝细胞系)移植14d组、造模+CL-1细胞(人肝细胞系)移植28d组,8只/组。方法:①5组均建立2-乙酰氨基芴+四氯化碳+环磷酰胺肝损伤模型。②利用治疗性肝再生策略,将人骨髓干细胞移植到大鼠肝脏内诱导分化为肝细胞。造模+人骨髓干细胞移植14d组移植人骨髓干细胞后观察14d,造模+人骨髓干细胞移植28d组移植人骨髓干细胞后观察28d,造模+CL-1细胞移植14d组移植CL-1细胞后观察14d,造模+CL-1细胞移植28d组移植CL-1细胞后观察28d,单纯模型组未进行细胞移植。③各组在正常状态下以及移植前后进行血清标本的采集与肝功能检测。应用免疫组化、聚合酶链反应法、实时荧光定量反转录聚合酶链反应技术检测各组大鼠肝脏内人白蛋白的mRNA的表达。主要观察指标:①人骨髓干细胞移植对大鼠肝功能转氨酶及总胆红素含量的影响。②各组大鼠病理切片肝细胞形态检查结果。③各组大鼠肝脏中人主要组织相容性抗原-Ⅰ类阳性率。④各组大鼠肝脏中大鼠Sox11序列、人Alu-sx序列、人白蛋白mRNA基因的表达。结果:实验选用40只大鼠,全部进入结果分析。①人骨髓干细胞移植对大鼠肝功能转氨酶及总胆红素含量的影响:各细胞移植组在正常状态以及细胞移植前与单纯模型组基本相似(P>0.05);与正常状态比较,细胞移植前各组均显著增高(P<0.01);与细胞移植前比较,各细胞移植组在细胞移植后均显著降低(P<0.01),但仍高于正常状态下的转氨酶、总胆红素含量(P<0.01)。②各组大鼠病理切片肝细胞形态检查结果:正常情况下肝脏病理切片显示肝细胞排列成条索状,围绕中央静脉成放射状排列,汇管区无炎性细胞浸润;单纯模型组呈大片状坏死表现;人骨髓干细胞移植组可见一些坏死后增生性改变;CL-1细胞移植组可见卵圆细胞以及小胆管增生。③各组大鼠肝脏中人主要组织相容性抗原-Ⅰ类阳性率:单纯模型组为0,造模+人骨髓干细胞移植14d组为(13.03±0.18)%,造模+人骨髓干细胞移植28d组为(9.47±0.46)%,造模+CL-1细胞移植14d组为(10.27±0.50)%,造模+CL-1细胞移植28d组为(9.84±0.23)%。④各组大鼠肝脏中基因序列聚合酶链反应检测结果:单纯模型组大鼠肝脏中只检测到大鼠Sox11序列;而人骨髓干细胞移植、CL-1细胞移植各时间组均可检测到人Alu-sx序列和大鼠Sox11序列。⑤各组大鼠肝脏组织实时荧光定量反转录聚合酶链反应检测结果:单纯模型组大鼠肝脏组织中未检测到人白蛋白mRNA基因表达,人骨髓干细胞移植、CL-1细胞移植各时间组以及阳性对照均可检测到人白蛋白mRNA基因表达。结论:人骨髓干细胞移植能促进肝损伤大鼠的肝功能恢复,人源性细胞在肝损伤大鼠肝脏中的替代率约10%,提示人骨髓干细胞在异体内均可转化为肝细胞并可实现部分替代。

摘要：我国这些年注重的是GDP的增长,而经济持续高速增长在很大程度上则依托了自然资源和劳动力的低回报,与发达国家相比,中国仍然是资源、能源密集型的经济增长方式状态,高消耗、高污染,低附加值的产业比重偏高,第二、第三产业中技术和知识密集的高附加值的产业比重偏低。加快培育和发展战略性新兴产业,转变经济发展方式,对我国税收制度的改革提出了新的要求。改革和完善现行分税制,合理地设计税制结构,降低流转环节的税赋,强化所得税的调节分配功能,科学地确定税费体系,改革行政支出结构,对于经济结构调整和转变经济发展方式具有重要作用。

摘要：背景:通过直接转入基因可强化调控骨髓间充质干细胞特异性分化。所以,有效的基因转染技术是髓间充质干细胞可以在组织工程中使用的关键。目的:选择NucleofectorTM技术转染大鼠骨髓间充质干细胞的优化转染方案,为高效体外转染大鼠髓间充质干细胞提供一个新方法。设计、时间及地点:对比观察细胞基因工程实验,于2007-10/12在南方医科大学珠江医院神经外科实验室完成。材料:骨髓间充质干细胞来源于SD大鼠,三四周龄,清洁级,体质量60~70g。实验过程:采用密度梯度离心法分离培养大鼠骨髓间充质干细胞,采用全骨髓法+神经干细胞培养基获得巢蛋白阳性细胞。运用NucleofectorTM技术的A33及A31程序,分别用1,5,10μg重组质粒pEGFP-C1转染骨髓间充质干细胞及巢蛋白阳性细胞,并将转染后的细胞分别培养在含体积分数为0.10及体积分数为0.20胎牛血清的培养基中。主要观察指标:①通过LeicaDMIRE荧光显微镜下观察和计数表达绿色荧光的细胞计数转染率。②台盼蓝排斥实验检测细胞活力。③用RT-PCR法分析胰腺十二指肠同源基因1基因在转染细胞中的表达。结果:应用NucleofectorTM技术的A33程序转染神经干细胞较转染骨髓间充质干细胞的转染率高,并优于A31程序。转染后在含体积分数为0.20胎牛血清中培养的细胞24h转染率及存活率均显著高于在含体积分数为0.10胎牛血清培养的细胞(P<0.05)。RT-PCR检测转染重组质粒的巢蛋白阳性细胞中可见胰腺十二指肠同源基因1的mRNA表达,未转染胰腺十二指肠同源基因1的巢蛋白阳性细胞无胰腺十二指肠同源基因1的mRNA表达。结论:运用NucleofectorTM技术的A33程序以5μg的DNA转染骨髓来源的巢蛋白阳性细胞,转染后的细胞接种于含体积分数为0.20胎牛血清的培养基中可获得较高的转染效率及较高的存活率。

摘要：背景:随着生物人工肝在临床上的应用,需要有一种方便、有效、实用的保护生物反应器装载细胞活力及功能的方法,设计有自主知识产权的生物人工肝用肝细胞的低温保护液迫在眉梢。目的:验证海藻糖作为低温保护剂在4℃低温保存肝细胞的作用。方法:采用C3A人永生化肝细胞系在不同低温保存液(DMEM培养液,乳酸钠林格氏液,加有不同浓度海藻糖的乳酸钠林格氏液,UW液)4℃保存24,48,72h。复苏后行细胞活力、细胞损伤指标、氧自由基代谢相关指标等检测,并通过荧光双染法观察细胞凋亡情况。结果与结论:不同低温保存液保存不同时间C3A细胞的活力、细胞损伤及细胞凋亡表现均有所不同,其中同时间点不同浓度海藻糖组均优于单用乳酸钠林格氏液组,但不如UW液组(P0.05),提示海藻糖能有效减轻低温对肝细胞凋亡及缺血再灌注损伤的程度,可成为低温保存液中有效及重要的保护剂组分。

摘要：1 原文的要点作者应用不同品系的大鼠进行原位肝移植,在肝移植术后不同时间用放免法检测血中透明质酸(HA)的浓度.比较正常组、同基因移植组、异基因移植组以及异基因移植+环孢酶素 A(CsA)组间透明质酸变化的差异,以及各组转氨酶(ALT)和总胆红素(Bilirubin)的变化情况.结果表明肝移植后血清 HA水平与正常组比较有明显升高(P<0.01);而术后6 d排斥反应组 HA 水平明显高于同基因移植组和异基因移植+CSA 组(P<0.01);ALT 和 Bilirubin 在术后9 d才出现明显差异.作者认为由于急性排斥反应造成肝内皮细胞的损伤,导致 HA 水平在术后6 d 时高于其他处理组;连续测定肝移植术后的 HA 水平有助于排斥反应的早期诊断.本文立题新颖,构思独特,实验设计比较合理,放免法检测 HA 浓度特异性强,检测血中HA 水平反映移植排斥反应的研究在国内还没有发现有相关报道.就原文内容提出几点商榷意见:①实验动物品系不纯,SD 大鼠以及 Wistar 大鼠属于封闭群,个体之间差异较大,如能够用近交系大鼠则更具有说服力.②内源性 HA 水平与冷缺血保存及再灌注损伤等因素关系密切,在术后数小时至数天内便恢复正常.③同时检测内源性 HA 水平和外源性 HA 短期清除率则更全面地反映机体内移植排斥反应情况.④统计方法应该列出.2

摘要：目的探讨根据胆囊三角解剖特点设计的经脐单孔腹腔镜胆囊切除术（ SILC）的可行性和临床疗效。方法回顾性分析2012年3月—2013年3月南方医科大学珠江医院肝胆二科采用“三点法”经脐SILC治疗的204例胆囊良性病变患者的临床资料,其中男85例、女119例,年龄23~68岁、平均47岁；胆囊结石176例,胆囊息肉21例,胆囊结石和息肉并存者3例,胆囊腺肌病4例。结果204例中,198例获得成功,术中胆囊三角均暴露良好,手术成功率为97.1%（198/204）；4例在剑突下增加1个操作孔,2例中转开腹。198例手术成功患者均随访1个月,均恢复良好,无腹痛、发热、胆漏、出血及切口感染等并发症。术后2周复查,手术切口处未见明显手术瘢痕。结论根据胆囊三角解剖特点设计的经脐SILC能够在术中良好地暴露胆囊三角,该方法操作简单、安全、可行性好,性价比高,是一种值得临床推广的单孔腹腔镜胆囊切除方法。