摘要：蝎毒液中的K+通道阻断剂对于研究细胞特定K+通道的药理学特性和生理学作用具有重要的价值 .根据已报道的一种Ca2 +激活K+通道阻断剂BmP0 1的氨基酸序列设计 1对“背对背”简并引物 ,运用反向PCR策略从中国东亚钳蝎毒腺组织中首次克隆到其全长cDNA ,它由 5′UTR ,ORF和 3′UTR 3个部分组成 .翻译起始密码子ATG旁侧序列AAAATGA在蝎Na+通道毒素和原生生物基因中高度保守 ,表明这类基因可能存在共同的翻译起始机制 ;3′UTR含有poly(A)信号 .ORF编码 5 7个氨基酸残基 ,N端 2 8个残基为信号肽序列 ,富含疏水性氨基酸 ,其长度显著不同于已报道的蝎Na+通道毒素信号肽 ,C端 2 9个残基为成熟毒素 ,其氨基酸序列与天然BmP0 1完全一致 .

摘要：以东亚钳蝎(Buthus martensii Karsch,BmK)BmαTX14全长cDNA序列设计引物,克隆BmαTX14成熟肽,插入毕赤酵母表达载体pPIC9K中,转化酵母,诱导表达。Tricine-SDS-PAGE和Westernblot分析显示,表达产物以可溶性分子形式存在于培养上清中,诱导84h时的表达量达到高峰,约为120mgL。通过Ni金属螯合层析柱亲和层析、聚乙二醇沉淀、凝胶分子筛层析获得纯化的rBmαTX14融合蛋白,经毒性实验表明,具有明显的抗昆虫活性。同时以蝎基因组总DNA为模板进行PCR扩增,得到BmαTX14基因克隆,序列分析显示:BmαTX14在编码信号肽的基因序列中有1个长408bp的内含子,其基因组织结构具有α型Na+通道毒素的特征。从功能活性和基因组织结构两个角度证实BmαTX14为α型Na+通道毒素。

摘要：根据从东亚钳蝎 (ButhusmartensiiKarsch ,BmK)毒腺cDNA文库中筛选得到的长链钾离子通道毒素BmTXKβ基因序列设计引物 ,采用Vectorette方法克隆其 5′及 3′侧翼区。结果表明 :BmTXKβ在编码信号肽的基因序列中有一大于 997bp的内含子 ,并且其成熟肽中也有一个 886bp内含子 ,而目前已知的其他蝎毒素只在信号肽中有一个内含子或没有内含子。

摘要：东亚钳蝎 (ButhusmartensiiKarsch ,BmK)蝎毒素BmKBT(又名BmKabT)是一个在初级结构上相似于β类哺乳动物毒素和功能接近于α类哺乳动物毒素的Na+ 通道毒素 .基于从毒腺cDNA文库中筛选得到的全长BmKBT前体核苷酸序列设计引物 ,以蝎基因组总DNA为模板进行聚合酶链式反应 (PCR) ,将PCR产物克隆至T载体、测序 .序列分析表明 :在BmKBT信号肽编码区的 3′端的- 4位Gly密码子的第 1位与第 2位碱基中有 1个长 2 2 5nt的内含子 ,插入位点距离该基因的起始密码子 4 6nt ,AT含量为 78 7% ,其内含子可能的剪接分枝位点距离 3′剪接受体位点 4 7nt.内含子的大小及其基因组织结构分析表明 :BmKBT具有与α类哺乳动物毒素类似的基因组织结构 ,进一步说明BmKBT是一个介于α类和β类Na+ 通道毒素之间的中间型蝎毒素 。