摘要：【目的】杧果露水斑病是当前生产上影响杧果产业的重要病害之一,因潜伏期长常在发病初期不易被察觉而错过防治适期,建立其主要致病菌Cladosporium cladosporioides的快速准确检测方法,对于该病的早期诊断和及时防控尤为重要。【方法】将该病菌的ITS序列与NCBI中的数据大量比对后,在差异位点大的区域设计了8对引物,通过筛选获得两对特异性良好的引物及其扩增条件。【结果】两对特异性引物分别是ML-SF9/ML-SR5和ML-SF10/ML-SR10,扩增条件:94℃4 min;94℃45 s,65℃45 s,72℃1 min,36周;72℃10 min,特异条带大小分别为408 bp和424 bp。为了提高检测的灵敏度,又与真菌通用引物ITS1/ITS4结合后,建立了杧果露水斑病病原菌的两套巢式PCR快速检测体系,可检测病菌DNA的含量最低为3.55×10-9ng·μL-1,比常规PCR灵敏度提高了1万倍,且能实现对潜伏期果实的特异性检测。【结论】此技术操作简单、特异性强、灵敏度高,为杧果露水斑病的早期诊断提供了新方法。

摘要：病程相关基因非表达子（NPR1）是植物抗病信号传导的关键基因。以香蕉抗病香蕉品种为材料．根据NPR1基因序列在保守区设计引物．从香蕉cDNA中克隆获得NPR1基因片段．以RACE的方法克隆获得香蕉NPR1基因的全长，并命名为GCT119-NPR1。香蕉GCT119-NPR1基因最大阅读框（ORF）为1707bp。生物信息学分析结果表明，该基因含有ANK和BTB两个结构域．其中ANK结构域是NPR1基因中非常重要的结构域，在蛋白质相互作用中起着至关重要的作州。同源性分析表明．该基因与已克隆发表的NPR1基因氨基酸序列同源性为67％～82％。将其构建植物表达载体．为下一步转化工作奠定基础。

摘要：建立了检测芒果畸形病的有效方法。利用Fusarium proliferatum的钙调蛋白基因序列设计外侧引物PRO1/PRO2和内侧引物O1/O2,采用引物PRO1/PRO2可以从芒果畸形病病原菌基因组中扩增出527 bp的特异性基因片段,采用引物O1/O2可获得477 bp的基因片段。巢式PCR的检测灵敏度达5×10-5ng/μL,是常规PCR的100倍。此法具有良好的特异性和检测灵敏度,为芒果畸形病的早期诊断和及时有效的防治提供技术方法和理论依据。

摘要：芒果细菌性黑斑病是由野油菜黄单胞菌芒果致病变种(Xanthomonas campestris ***)引起的细菌性病害,是芒果生产中最为重要的病害之一。本试验通过对比已报道的黄单胞属的抗铜基因copA序列的分析、比较,设计简并引物Copa-F/Copa-R,采用同源克隆法从芒果细菌性黑斑病病菌中扩增出约1 800 bp的DNA片段。序列分析表明,该基因片段含有1个完整的copA同源基因(GenBank accession ***890405.1),其核苷酸序列全长1 794 bp,编码597个氨基酸,其分子量约66.271 kDa,等电点(PI)为6.40。系统进化树结果显示,该基因编码的氨基酸序列与Xanthomonas属多个不同种的抗铜基因聚为一类。

摘要：为了解常用杀菌剂单剂及混配对杧果叶片的安全性和对叶部病害的防效,选择17种杀菌剂,按推荐用量1倍、2倍共设置34个单剂处理,并根据当地防治习惯设计29个混配组合,按推荐用量1倍、2倍共设置58组混剂处理。施药后调查杧果叶片药害情况及各处理对叶部病害的防效,发现34个单剂处理中有7个产生了药害,58组混剂处理中有14组产生了药害。多数混剂组合对杧果叶部病害的防效表现出增效作用,个别组合出现拮抗作用。

摘要：根据轮枝样镰刀菌(Fusa rium ve rticillioides)和藤仓镰刀菌(***)veA同源基因相关序列设计引物,利用PCR与RT-PCR技术分别克隆了香蕉枯萎病菌2个生理小种的FocV eA基因序列和开放阅读框,同时对该基因的编码蛋白进行序列特征、系统发育与结构域分析。结果表明,2个生理小种的FocVeA基因(分别命名为F1VeA和F4VeA)的DNA片段全长分别为1 693 bp和1 690 bp,开放阅读框分别为1 599 bp和1 596 bp,分别编码532个和531个氨基酸。F1VeA和F4VeA基因预测氨基酸序列相似性均为9 9%,与G enBank中公布的Fusarium ***基因氨基酸序列均有78%-99%相似性。系统聚类分析显示,F1V eA和F4VeA与GenBank中已登录的轮枝样镰刀菌(***)和藤仓镰刀菌(***)等veA同源蛋白高度同源。蛋白质保守域搜索表明,FocVeA具有veA蛋白的功能域,属于veA蛋白家族的一员,推测该基因可能参与调控*** ***的生长、毒素合成及致病性等。

摘要：根据几种丝状真菌Slt2类MAPK的保守氨基酸序列设计简并引物,从巴西橡胶树棒孢霉落叶病菌[Corynespora cassiicola(Berk.&Curt.)Wei]中扩增出MAPK同源基因的部分片段,再利用染色体步移法延伸该片段的上、下游邻接序列,获得MAPK编码基因的全长序列,命名为CMP1(GenBank Accession ***321364)。序列分析表明,该基因含有5个外显子和4个内含子,编码417个氨基酸的多肽,推测分子量为47.5 ku,等电点为5.57。CMP1含有一个参与双重磷酸化作用的MAPK蛋白激活域(TEY),其氨基酸序列与丝状真菌的MAPK,AAslt2和MAP-kinase等高度同源。系统聚类结果显示,该基因与白菜黑斑病菌(Alternaria brassicicola)、细交链格孢菌(***)和玉米小斑病菌(Cochliobolus heterostrophus)的Slt2类MAPK基因具有较高的同源性。Southern杂交分析表明,CMP1基因在巴西橡胶树棒孢霉落叶病菌基因组中以单拷贝形式存在。

摘要：【目的】明确香蕉枯萎病菌(Fusarium oxysporum ***)2个生理小种(Foc1和Foc4)GATA转录因子基因(Fnr1)的序列差异,为进一步研究Fnr1在香蕉枯萎病菌致病过程中的作用奠定基础。【方法】根据番茄枯萎病菌2号生理小种(*** *** race 2)和水稻恶苗病菌(Gibberella fujikuroi)的GATA转录因子的氨基酸序列设计引物,利用重叠延伸PCR和RT-PCR技术分别克隆了香蕉枯萎病菌2个生理小种的Fnr1的全长DAN,并对该基因所编码蛋白进行了氨基酸序列特征、系统发育与保守结构域分析。【结果】2个生理小种的Fnr1(分别命名为F1nr1和F4nr1)DNA片段全长分别为2 967 bp和2 958 bp,开放阅读框架分别为2 727 bp和2 718 bp,分别编码908个和905个氨基酸。F1nr1和F4nr1的预测氨基酸序列相似性为99%,与GenBank中公布的Fusarium ***转录因子氨基酸序列均有88%~99%相似性。氨基酸序列聚类分析显示,F1nr1和F4nr1与GenBank中已登陆的香蕉枯萎病菌1号生理小种(*** *** race 1,Foc1)、尖孢镰刀菌(***)和番茄尖孢镰刀菌2号生理小种(*** *** race 2)等物种的GATA转录因子蛋白高度同源。蛋白质保守域搜索表明,F1nr1和F4nr1具有GATA结合蛋白的功能域,属于GATA结合蛋白家族的一员。【结论】香蕉枯萎病菌Fnr1基因具备GATA构型转录因子家族的序列特征,推测该基因可能参与调控*** ***氮调控相关基因的表达及致病性等。

摘要：参照油梨炭疽病菌(Colletotrichum gloeosporioides)的环境pH应答转录因子基因pac1设计1对特异性引物,以芒果炭疽病菌(***)基因组DNA为模板,扩增获得大小为2 625 bp的目的基因片段。序列分析结果表明,目的片断包含完整的阅读框,与油梨炭疽病菌*** pac1基因相应片段长度相同,二者碱基序列同源性达97%。用RT-PCR技术获得pac1基因cDNA片段,证实目的基因片段中存在3个大小分别为59,50,71 bp的内含子。拼接的全长cDNA长1 755 bp,推测编码的氨基酸序列长584个氨基酸残基,与推测的油梨炭疽病菌pac1基因所编码的蛋白质同样大小,二者氨基酸序列相似性达99%,只有1个氨基酸的差异,可以肯定克隆的目的片段为*** pac1基因,为进一步研究***侵染芒果时的pH调控奠定了基础。

摘要：根据黄单孢菌属LuxR基因的同源性设计简并引物XF／XR,采用同源克隆法从芒果细菌性黑斑病菌（Xanthomonas campestria ***）中获得了约1．4kb的DNA片段。经测序和序列同源性分析表明．该基因片段长1422bp含有一个完整的LuxR同源基因，并命名为XcmR。生物信息学分析表明．XcmR基因完整ORF（开放阅读框）全长765bp，编码254个氨基酸，分子质量和等电点分别约为28．2ku和8．9，与GenBank中公布的Xanthomonas属LuxR或AhyR／AsaR氨基酸序列具有86％～99％相似性。系统聚类结果表明，XcmR与来源于柑桔溃疡病菌（*** ***）、番茄疮痂病菌（***）、水稻白叶枯菌（*** ***）和甘蓝黑腐病菌（***如）的LuxR蛋白聚成一支。NCBI网站蛋白质保守结构域搜索表明，XcmR是LuxR蛋白家族的一员，具有LuxR蛋白相似结构。