摘要：猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)、猪瘟病毒(CSFV)和猪圆环病毒Ⅱ型(PCV-2)是引发猪繁殖障碍的主要病原,建立其基因芯片快速检测体系,对开发猪繁殖障碍快速检测试剂盒具有重要意义。根据GenBank中已发表的PRRSV、CSFV和PCV-2的病毒基因组序列,设计合成特异性引物和特异性较强的60mer的寡核苷酸探针,并将探针按所设计阵列固定于表面经氨基化修饰的玻片上,制备出寡核苷酸芯片。通过引物标记及特异性验证,建立了带标记引物的多重PCR检测体系,从而产生大量可与寡核苷酸探针特异性互补的带标记的DNA片段。将标有荧光染料的扩增产物与芯片上寡核苷酸探针杂交,扫描、分析芯片上荧光信号。结果表明,芯片上各样本对应探针位点呈现阳性荧光信号,而阴性对照和空白对照则基本不能检测到荧光信号。分别用基因芯片检测方法和PCR/RT-PCR检测60份临床病料,两者符合率高达92%,表明该检测技术能够用于临床病料的检测及快速诊断PRRSV、CSFV和PCV-2。

摘要：根据猪繁殖与呼吸综合征病毒 (PRRSV)美洲型膜蛋白和核衣壳蛋白基因序列 ,设计了一对含有EcoRI和BamHI酶切位点的引物 ,用RT PCR对四个流产猪场的病料进行了检测 ,扩增出约 918bp的基因片段。通过病毒分离、酶切鉴定和序列分析证实为PRRSV感染。结果说明应用所设计的引物进行RT PCR快速检测PRRS是可行的 ,为我国快速特异诊断PRRS和PRRSV强毒株的深入研究奠定了基础。

摘要：以 Ｐ Ｒ Ｒ Ｓ Ｖ 弱毒株膜蛋白（ Ｍ） 和核衣壳（ Ｎ） 蛋白基因为模板，设计的一对含有 Ｅｃｏ Ｒ Ｉ 和 Ｂａｍ Ｈ Ｉ酶切位点的引物，通过 Ｒ Ｔ Ｐ Ｃ Ｒ 扩增出一约９００ ｂｐ 的 Ｍ Ｎ 基因片段，将此基因片段成功克隆于高效表达载体ｐ Ｂ Ｖ２２０ ，构建成重组质粒ｐ Ｂ Ｖ Ｍ Ｎ，导入大肠杆菌 Ｄ Ｈ５α，经温敏诱导，成功地表达了 Ｍ Ｎ 基因。表达产物经 Ｓ Ｄ Ｓ Ｐ Ａ Ｇ Ｅ 电泳和 Ｗｅｓｔｅｒｎ ｂｌｏｔ 印迹分析，其分子量约３４ ｋ Ｄ，与兔抗 Ｐ Ｒ Ｒ Ｓ Ｖ 高免血清发生反应，经光密度扫描分析，表达产物量占菌体总蛋白的１２ ％ 。该研究为 Ｐ Ｒ Ｒ Ｓ

摘要：猪繁殖和呼吸综合征病毒（ＰＲＲＳＶ）的基质膜（Ｍ）蛋白和核衣壳（Ｎ）蛋白是２种重要的结构蛋白。本试验根据ＰＲＲＳＶ美洲毒株的基因序列，设计了能够扩增Ｍ和Ｎ蛋白基因的１对引物，并在２个引物的两端分别加入ＥｃｏＲＩ和ＢａｍＨＩ酶切位点，经ＲＴ－ＰＣＲ技术获得了一约９５０ｂｐ的目的基因片段，并将此基因克隆于ＰＢＶ２２０载体，构建了ＭＮ蛋白基因重组质粒ＰＢＶＭＮ，进一步由重组质粒回收ＭＮ基因片段亚克隆于ｐＳＫ＋（ｐＢｌｕｅｓｃｒｉｐｔＳＫ＋）测序载体，构建了重组质粒ＰＢＳＭＮ，经部分序列分析鉴定，重组质粒含ＭＮ蛋白基因。此基因的克隆为进一步研究该病毒ＭＮ蛋白免疫学特性及其分子基础和基因诊断技术奠定了基础。

摘要：合理药物设计是现代药物化学重要组成部分,对指导创新药物研究具有指导作用,不仅可以有效提高药物研究效率、节省药物开发的研究成本,而且能够促进药学化学学科的快速发展。该文基于现代药物设计理论基础与技术方法,着重介绍基于性质、配体、受体、机理的药物设计方法及在药物化学教学中的相应案例,阐述药物化学中的合理药物设计思想。药物化学理论教学中融入创新药物设计理念,可增强学生在药物研究中的创新意识,为培养创新型药学人才奠定基础。

摘要：介绍了电磁铁涡流制动的工作原理。通过建立二维电磁场分析模型,对涡流制动系统进行了电磁场数学分析,推导并求解出了制动力和运行速度之间的关系表达式。同时,利用ANSYS有限元分析软件建立了电磁铁分析模型,通过改变励磁电流、气隙厚度、导轨厚度来求得这些参数对制动力和吸引力的影响,从而为涡流制动系统设计提供了依据。

摘要：目的设计合成PCV2 CAP的B细胞表位抗原肽并对其进行鉴定。方法采用DNAStar和BcePred分析软件并结合吴玉章氨基酸抗原指数计算方法预测PCV2 CAP的B细胞表位．以此合成4分支多重抗原肽结构．同时串联一个通用型n表位；采用Fmoc法合成4分支PCV2CAP多重抗原肽（MAP），通过高效反相液相色谱（RP-HPLC）、质谱（MS）分析对其进行初步鉴定。以合成的抗原肽免疫昆明系小鼠及兔，观察体液免疫反应。结果初步筛选出3种抗原指数较高的表位，即98～103aa（命名为B98），156～162aa（命名为B156），228～233aa（命名为B228）；合成的多重抗原肽经RP-HPLC层析后，纯度达到92.49％，MS鉴定其相对分子质量一致，误差小于0．1％。以合成的MAP疫苗免疫小鼠及兔后，可产生高滴度的特异性抗PCV2CAP抗体。结论PCV2CAP的B细胞新表位多重抗原肽有免疫原作用，将为PCV2CAP表位肽疫苗的研究奠定基础。

摘要：目的为得到实验室现有的山羊痘、绵羊痘、疙瘩皮肤病病毒的ORF132基因序列,以便于后续研究。方法本实验在参考GenBank公布的羊痘病毒、疙瘩皮肤病病毒ORF132基因序列的基础上,设计了3对引物,对1株山羊痘病毒,1株绵羊痘病毒,两株疙瘩皮肤病病毒进行PCR扩增,克隆扩增产物,进行测序分析。结果测序结果在NCBI网站进行比对后发现其与标准毒株有较大相似性,同时存在不同的变异现象。结论羊痘病毒属的3种病毒同源性极高,相比之下,ORF132基因具有较好的特异性,通过该次的基因分析,可为PCR引物设计和基因芯片探针设计提供基础。

摘要：利用含有PRRSV N蛋白基因的重组表达质粒pREST-N的大肠埃希菌,在37℃条件下,用终浓度为1 mmol/L的IPTG进行诱导表达,经SDS-PAGE分析,目的基因高效表达出分子质量约为17.8 ku的可溶性融合蛋白,分子质量与预期设计的N蛋白大小相符。经His-Ni2+柱亲和层析纯化后,得到了高纯度的N蛋白。通过Western blot分析,该重组N蛋白与兔抗PRRSV高免血清能够发生特异性反应,说明其具有良好的反应原性,为进一步研究PRRSV的抗体检测方法及诊断抗原的批量生产工艺奠定了基础。

摘要：基于PCV2 CAP蛋白的氨基酸序列，采用Kyte-Doolittle的亲水性方案、Emini方案、Karplus方案和Jameson-wolf抗原指数方案，辅以对PCV2 CAP蛋白的二级结构柔性区域分析，并结合吴玉章氨基酸抗原指数计算方法预测CAP蛋白的B细胞表位。结果表明，最有可能的B细胞优势表位位于CAP蛋白N端第4～18，23～28，32～41，57～64，96～103，175～182区段和第224～233区段。本研究用多参数预测PCV2 CAP蛋白的B细胞表位，为多肽疫苗的设计提供理论依据。