摘要：本研究旨在原核表达副猪嗜血杆菌细胞致死膨胀毒素(Cytolethal distending toxin,CDT),并作用于猪髋动脉内皮细胞(Pig iliac endothelial cells,PIEC),以研究其细胞毒性。根据本实验室完成的副猪嗜血杆菌SH 0165株(血清5型)全基因组序列,针对cdtA、cdtB和cdtC基因序列设计引物,扩增的基因片段大小分别约为681、834和531bp。将靶基因克隆到原核表达载体pET28a中,再转化到*** BL21(DE3),IPTG诱导表达3h,SDS-PAGE和Western blot检测证实表达产物以包涵体形式存在,大小分别约36、34和28ku。通过体外重构毒素与PIEC细胞作用3h,继续培养72h观察细胞形态学变化。结果表明,CdtABC全毒素致PIEC细胞膨胀、空泡形成、细胞凋亡等,而其他试验组变化不显著。结果提示,CDT毒素可能在细菌感染与致病中发挥着重要作用。

摘要：根据猪胸膜肺炎放线杆菌 (Actinobacillus pleuropneumoniae,APP)的 apx A基因序列设计了 1对可扩增 1个4 2 2 bp片段的特异性引物 ,成功地建立了一种检测 APP的快速 PCR方法 ,并确定了其特异性和灵敏性。对血清 1～ 13型等 13个 APP标准株均能扩增出预期 4 2 2 bp的特异性条带 ;对猪副嗜血杆菌、多杀性巴氏杆菌、支气管败血波氏杆菌、大肠杆菌、葡萄球菌、链球菌的扩增结果为阴性。对 APP菌液最低检出浓度为 6 8CFU/ m L(D6 0 0 为 0 .0 0 3)。 12株临床分离菌的 PCR扩增结果与生化鉴定结果是一致的。该方法能从病料中分离培养 8h的混合菌群中快速检测APP,可用于 APP的快速诊断和流行病学的调查。

摘要：　从全国十多个省市送检的疑似患多发浆膜炎与关节炎猪的病料中分离到 32株细菌,进行了细菌形态观察、培养特性和生化特性鉴定;根据副猪嗜血杆菌 16SrRNA序列设计引物进行PCR扩增, 将 822bp扩增片段连入T 载体后测序, 再与GenBank(M75065 )中的序列进行比对,表明其与国外副猪嗜血杆菌菌株 16SrRNA序列的同源性为 97%以上,确定为副猪嗜血杆菌(Haemophilusparasuis, Hps)。将其中的 15株按Kieletein Rapp Gabriedson(KRG)琼脂扩散血清分型方法进行血清型鉴定,结果为血清 5型 3株、血清 4型 4株、血清 13型2株、血清 12型 2株,另外有 4株不能进行分型。该结果表明副猪嗜血杆菌在我国广泛存在。

摘要：本试验分别针对志贺样毒素Ⅱ型变异体(SLT-Ⅱe)B亚基和F18ab菌毛fedA亚基保守序列设计2对引物,扩增长度分别为230 bp和510 bp,通过条件优化,建立了一种快速鉴定致猪水肿病大肠杆菌同时确定其致病因子的二重聚合酶链式反应(PCR)检测方法,对阳性扩增产物测序,结果都有很高的保守性。特异性试验和灵敏性试验表明:与其他6种猪常见致病菌(产毒多杀性巴氏杆菌、胸膜肺炎放线杆菌、波氏杆菌、副猪嗜血杆菌、沙门菌和链球菌)无交叉反应;菌体直接扩增法最低检出量为101cfu(D600为0.002)。通过该二重PCR检测方法对2004—2006年自猪肺、脑组织中分离的216株大肠杆菌进行鉴定,得到6株致猪水肿病大肠杆菌,其中3株既具有菌毛又产水肿毒素,另外3株仅产水肿毒素;菌毛阳性菌株占毒素阳性菌株的50%。