摘要：目的:探讨单个中性粒细胞中白介素-8β型受体(IL-8Rβ)mRNA的表达丰度。方法:采用倍比稀释相对定量单细胞RT-PCR方法分离纯化人外周血中性粒细胞并提取总RNA,针对IL-8RβmRNA设计引物,进行RT-PCR确认IL-8Rβ在中性粒细胞中的基因表达并优化反应条件。收集单个中性粒细胞胞内容物或完整细胞,以相同引物进行RT反应,再将后者所得的cDNA倍比稀释后,与前者共同经过两轮PCR扩增,并将最终产物以BamHI内切酶酶切鉴定产物的特异性。结果:IL-8RβmRNA在人中性粒细胞中有大量表达,单个中性粒细胞中亦能扩增出特异性的IL-8Rβ目的条带,并且将单个细胞内mRNA稀释104倍后仍可扩增出目的条带,BamHI内切酶酶切反应证实为目的产物。结论:人中性粒细胞表达IL-8RβmRNA,mRNA倍比稀释单细胞RT-PCR方法确认其丰度远高于一般mRNA含量,且此方法可在单细胞水平比较细胞内mRNA的丰度。

摘要：背景:脂筏是质膜上富含胆固醇和鞘磷脂的微结构域。甲基-β-环糊精(Methyl-β-cyclodextrin,mβCD)为脂筏破裂剂,破坏膜脂的完整性。目的:观察mβCD对甲酰甲硫氨酰-亮氨酰-苯丙氨酸(N-formyl-methionyl-leucyl-phenylalanine,fMLP)诱导的中性粒细胞极性化过程中的作用,及其与胞内游离钙离子浓度(Cytosolic free Ca2+concentration,[Ca2+]i)的关系。设计、时间及地点:开放性实验,于2007-02在南方医科大学公共卫生与热带医学学院环境医学研究室完成。材料:fMLP由美国Phoenix pharmaceuticals公司提供,mβCD由美国Sigma公司提供。方法:取健康志愿者外周静脉血5mL,采用重复梯度密度离心的方法分离中性粒细胞。根据诱导中性粒细胞极性化处理条件的不同分为3组,正常对照组、fMLP组、mβCD+fMLP组。正常对照组不加入任何试剂。fMLP组加入100nmol/LfMLP孵育15min。mβCD+fMLP组先加入10mmol/LmβCD预孵育15min,然后加入100nmol/LfMLP孵育15min。最后3组均滴入终浓度为10μmol/Lfuro-3/AM避光孵育45~60min。主要观察指标:倒置显微镜下观察中性粒细胞在不同处理条件下的细胞极性化情况,使用激光共聚焦显微镜监测[Ca2+]i在mβCD抑制细胞极性化过程中的变化。结果:fMLP可以诱导中性粒细胞的极性化,而预先使用10mmol/LmβCD孵育15min后,fMLP诱导的中性粒细胞极性化受抑制。同时,极性化过程中中性粒细胞的[Ca2+]i急剧增加,而mβCD预孵育后[Ca2+]i上升相幅度明显下降。结论:脂筏破裂剂mβCD抑制了fMLP诱导中性粒细胞极性化过程,该作用可能与[Ca2+]i变化有关。