摘要：目的构建分枝杆菌简单序列重复区间（inter-simple sequence repeat，ISSR）分型系统，为结核分枝杆菌的基因分型、菌种鉴定以及流行病学的研究提供新的研究工具和研究思路。方法根据结核分枝杆菌基因组中简单重复序列（SSR）的丰度和频率，设计用于分枝杆菌基因分型的ISSR引物，以分枝杆菌属的DNA为材料，分析DNA浓度、Mg^2＋浓度、dNTP浓度、Taq酶的含量以及退火温度对ISSR-PCR扩增结果的影响，构建分枝杆菌的ISSR分型体系，并通过该体系筛选获得扩增结果稳定、多态性强的引物。结果经过优化实验建立了分枝杆菌ISSR-PCR最佳反应体系，20μl的PCR反应液含有的组分和终浓度分别为：10ng模板DNA，1U Taq酶，0．5μmol／L引物，1．5mmol／L MgCl2，0．2mmol／L dNTPs。利用该反应体系从10个ISSR引物中，筛选出了3个稳定性高、重复性好的引物，对分枝杆菌属28个菌种的标准菌株及52株结核分枝杆菌临床分离株进行了ISSR遗传多样性分析。结果显示，28个分枝杆菌菌种，除了结核和牛分枝杆菌之间具有较高的相似性，两两之间存在着高度的遗传多样性；52株结核分枝杆菌菌株在用ISSR进行分型时，大部分菌株表现出了较高的遗传相似性。结论建立了分枝杆菌属的ISSR分型体系。