摘要：背景:基于纳米技术发展起来的纳米载体介导的磁性载药系统,在外加磁场作用下,能实现位点特异性靶向给药的目的,有利于提高病灶部位的局部药物浓度,从而进一步提高治疗效果,减少全身毒副作用。目的:研究磁性聚乳酸-羟基乙酸氧化酚砷纳米微粒的制备工艺,评价纳米粒子特性。设计:首先选择几个可能影响纳米微粒特性的因素进行了单因素实验,然后再根据实验结果,结合统计学中的正交设计,获得了最佳优化处方。单位:解放军第二军医大学长海医院特诊科。材料:实验于2005-01/2006-03在解放军第二军医大学药学院药剂教研室完成。实验用氧化酚砷购自美国Sigma公司,聚乳酸-羟基乙酸由山东医疗器械研究所提供,纳米级四氧化三铁购自美国Sigma公司,聚乙烯醇购自北京有机化工厂,二氯甲烷等其他试剂均为分析纯,购于上海国药集团化学试剂有限公司。方法:运用超声乳化-溶剂挥发法制备磁性聚乳酸-羟基乙酸氧化酚砷纳米微粒,通过透射电镜观察微粒形态,振动样品磁强计确证纳米微粒磁性的存在,激光粒径仪测定纳米粒的粒径大小和分布,高效液相法测定氧化酚砷的载药量及包封率,并计算氧化酚砷体外释放百分率。主要观察指标:磁性聚乳酸-羟基乙酸氧化酚砷纳米微粒的形态、粒径、载药量、包封率、磁性及体外释放情况。结果:①微粒包封率和载药量:实验制备的纳米粒平均包封率为34.2%;5批纳米粒载药量分别为3.06%,3.15%,3.18%,3.21%,3.41%,平均载药量为3.20%,批间差异较小,说明工艺稳定性、重现性好。②微粒形态:纳米微粒呈圆形,表面光滑,分布均匀,不粘连,磁性微球中可见非均匀分散的黑色不透光区,为四氧化三铁微粒。③微粒粒径:分布范围窄(140～500nm),平均290nm。④微粒磁性:在不断改变外加磁场的大小与方向的情况下,微粒具有不同的磁化强度,说明氧化酚砷聚乳酸纳米微粒具有一定的磁响应性。⑤体外释放实验:氧化酚砷经过最初的快速释放后,进入缓慢控释阶段,于第8天时达到最终基本稳定的平台期。结论:实验获得了较满意的磁性聚乳酸-羟基乙酸氧化酚砷纳米微粒制备工艺;该纳米微粒在外加磁场的情况下有较好磁靶向性的作用,同时具备良好药物缓释作用。

摘要：本文设计和合成了具有血管内皮细胞靶向性的环五肽RGD(cyclo-[Arg-Gly-Asp-D-Tyr-Lys],Tyr-RGD)修饰的纳米基因载体聚乙二醇-聚乙烯亚胺(PEG-PEI),并研究其纳米特性、载药特性及其体内外的肿瘤靶向特性。采用化学方法合成所需要的纳米载体,鉴定该纳米载体的纳米特性及载药特性,并采用体外血管内皮细胞竞争结合实验研究其靶向性,最后将荧光标记的纳米载体注入荷瘤小鼠体内,观察其肿瘤靶向性。Tyr-RGD-PEG-PEI纳米载体采用分步合成方法,所获得的载体粒径约为145nm,其对小分子干扰核糖核酸(siRNA)的包封率好,血浆内孵育30min,仅约3%的siRNA游离出来,结构稳定。薄层层析法分析鉴定其为单一斑点(Rf0.65)。受体竞争实验表明该纳米载体可有效地与多肽精氨酸-甘氨酸-天冬氨酸(RGD)竞争结合内皮细胞膜上的受体;荷瘤小鼠实验表明,载有荧光标记siRNA的Tyr-RGD-PEG-PEI纳米药物注射入小鼠体内24h后,主要分布在肿瘤组织内,而无Tyr-RGD靶向的纳米药物则除了瘤体内,还分布在肝脏、肺等脏器。合成的Tyr-RGD靶向纳米载体Tyr-RGD-PEG-PEI具有较好的纳米特性和高效的基因药物包封率,荷瘤裸鼠研究表明其肿瘤的靶向性明显优于无Tyr-RGD靶向的纳米药物。

摘要：目的:体外合成4条靶向人组织激肽释放酶7(kallikrein-related peptidase 7,KLK7)基因的片段,并筛选最有效siRNA片段,观察沉默KLK7表达对胃癌AGS细胞增殖和凋亡的影响。方法:设计4条靶向KLK7的siRNA片段(KLK7-siRNA-416、KLK7-siRNA-596、KLK7-siRNA-474、KLK7-siRNA-795),瞬时转染AGS细胞,qRT-PCR检测各干扰组KLK7 mRNA表达的变化,Western blotting检测AGS细胞中HK7蛋白(由KLK7基因编码)的表达,MTT法检测转染后AGS细胞的增殖,流式细胞术检测AGS细胞的细胞周期及凋亡。结果:4条KLK7-siRNA片段中以KLK7-siRNA-416的干扰效率最高,KLK7-siRNA-416组KLK7 mRNA表达率显著低于NC组[(0.32±0.049)%vs(0.93±0.071)%,P<0.01],KLK7-siRNA-416组转染48 h后AGS细胞HK7蛋白的表达水平显著降低[(1.18±0.198)vs(0.52±0.096),P<0.01]。KLK7-siRNA-416转染72 h后对AGS细胞增殖的抑制率达(37.70±0.12)%(P<0.05),该转染阻滞AGS细胞于G0/G1期但不影响AGS细胞的凋亡。结论:KLK7-siRNA沉默KLK7的表达可抑制AGS细胞的增殖,可阻滞细胞于G0/G1期,对细胞凋亡的作用不明显。

摘要：患者女，61岁，20年前行胆总管切开取石，2年前症状复发行胆囊切除，左肝叶切除加胆总管切开取石，4个月前胆总管结石症状反复，行逆行胰胆管造影（ERCP），术后发现胆总管十二指肠瘘，从瘘口取结石后并发急性胰腺炎，1周后腹痛消失，血淀粉酶恢复正常，但此后不能进食，反复呕吐，并反复出现胆道感染。

摘要：目的设计抽线式胰管金属支架,以利于取出胰管结石。方法收集3例确诊胰管结石并胰管远端狭窄,且ERCP取石失败者,应用十二指肠镜在主胰管置入抽线式金属支架,24～48h后再次ERCP取石。结果3例患者主胰管结石直径1～1.5cm,造影显示胰管远端狭窄。先置入抽线式胰管金属支架,24～48h后金属支架完全膨胀,插入气囊顺利取出全部结石,再将金属支架抽成丝样经活检孔取出。术后无出血、嵌顿、胰腺炎等并发症发生。结论内镜下胰管内置入抽线式金属支架取石,安全、有效,费用低廉,增加了胰管取石的成功率。